大豆天冬酰胺合成酶B基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 (2013年)

根据GenBank登陆大豆天冬酰胺合成酶（AS-B）基因序列（登录号：GMU55874）设计特异引物，通过PCR 扩增从大豆（Glycine max）cDNA 中克隆出AS-B 基因。将该基因克隆到pET30a（+）载体，构建重组表达载体pET30a-AS，转化大肠杆菌Rosetta（DE3）pLysS，并进行表达条件优化。结果表明，在16 ℃条件下，经0.5mmol・L-1 IPTG 诱导14 h，大部分重组AS-B 以可溶性蛋白的形式存在。经Ni-NTA 亲和层析和Sephadex G50 脱盐后，重