基因工程细胞工程知识点汇总
一、基因工程
(一）基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计,通过体外 DNＡ重组和
转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因工程是在ＤＮA 分子水平上进行设计和施工的，又叫做 DＮＡ重组技术。（一）基因工程
的基本工具 1.“分子手术刀"——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生
物中分离纯化出来的。（２）功能：能够识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列,并且使
每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性.（3)结果:经限
制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2。“分子缝合针"——DN
Ａ连接酶(1)两种ＤNA 连接酶（E·coliDNA 连接酶和 T4DNA 连接酶)的比较：①相同点：都缝
合磷酸二酯键。②区别:E·ｃoliＤNＡ连接酶来源于 T４噬菌体，只能将双链 DNA 片段互补
的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而Ｔ４DNA 连接酶能缝合两种末端，但连接平末端
的之间的效率较低.(2)与 DＮＡ聚合酶作用的异
同: DNA 聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷
酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA 连接酶是连接两个 DNA 片段的末端,形成磷酸二酯键。
3．“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具
有一至多个限制酶切点，供外源 DNA 片段插入。③具有标记基因，供重组ＤNA 的鉴定和选择。
（2)最常用的载体是ﻫ质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有
自我复制能力的双链环状 DNA 分子.（３)其它载体:
噬菌体的衍生物、动植物病毒（二)基因工程的基本操作程序
第一步：目的基因的获取1ﻫ.目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。
2.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转
录法_和化学合成法_。３.PCR 技术扩增目的基因（1)原理:DNＡ双链复制（2）过程:第一步:
加热至 90～95℃DNA 解链；第二步：冷却到 5５~60℃，引物结合到互补 DＮＡ链；第三步:加
热至 70~７５℃,热稳定 DNＡ聚合酶从引物起始互补链的合成。ﻫ第二步：基因表达载体的构
建 1。目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表
达和发挥作用。2．组成：目的基因+启动子＋终止子＋标记基因(１)启动子：是一段有特殊
结构的 DNA 片段，位于基因的首端，是 RＮA 聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出ｍ
RNA，最终获得所需的蛋白质。（２)终止子：也是一段有特殊结构的 DＮA 片段 ，位于基因
的尾端。(3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基
因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。
第三步：将目的基因导入受体细胞_1．转化的概念:是目的基因进入受体细胞内，并且在受体
细胞内维持稳定和表达的过程。2．常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞:采用最多的
方法是农杆菌转化法，其次还有 基因枪法和花粉管通道法等.将目的基因导入动物细胞：最
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