基因工程的定义:按照预先设计好的蓝图,利用
现代分子生物学技术，特别是酶学技术，对遗
传物质 DNＡ直接进行体外重组操作与改造,将
一种生物(供体)的基因转移到另外一种生物
（受体）中去,从而实现受体生物的定向改造
与改良。
基因工程的基本过程:切、接、转、增、检
基因工程理论依据：a） 生物的遗传物质是
DNA。b） DNA 的双螺旋结构和半保留复制
机理.c） 遗传信息的传递方式(中心法则）和
三联体密码子系统的建立
遗传工程：指以改变生物有机体性状为目标，
采用类似工程技术手段而进行的对遗传物质
的操作,以改良品质或创造新品种.包括细胞工
程和基因工程等不同的技术层次。
克隆。指由同个祖先经过无性繁殖方式得到的
一群由遗传上同一的 DNＡ分子、细胞或个体
组成的特殊生命群体。
限制性核酸内切酶。是一类能识别双链 DNＡ
中特殊核苷酸序列,并使每条链的一个磷酸二
酯键断开的内脱氧核糖核酸酶。
限制性内切酶由三个基因位点所控制:hsd
R-－—限制性内切酶，hsｄ Ｍ—-－限制性
甲基化酶，ｈｓd S———控制两个系统的表
达.Hｓd S-识别特定 DＮA 序列，Hsd M－甲基
化,Hsd R-限制性内切酶功能。
命名法:例如Ｈａemoｐhｉlｕsinfｌuenzue)d
株中分离的第三个酶：
Ｈｉn
d ＩＩI
同裂酶:不同来源的限制酶具有相同的识别位
点和切割位点。同尾酶:来源不同、识别序列
不同,但产生相同粘性末端的酶
粘性末端：DNＡ末端一条链突出的几个核苷
酸能与另一个具有突出单链的 DＮA 末端通过
互补配对粘合,这样的 DNA 末端，称之。
酶活性单位.在合适的温度和缓冲液中，在 50μ
ｌ反应体系中,1 小时内完全切割 1 微克 DNA
所需的酶量为１个酶活性单位Ｕ.
星活性：指限制性内切酶在非标准条件下,对
与识别序列相似的其它序列也进行切割反应，
导致出现非特异性的ＤNＡ片段的现象。引起
星活性原因:若使用 buｆfer 不当, 会有 sｔaｒ
ａctｉvｉty,而 sｔar aｃｔivｉty 是指限制酶
对所作用的ＤNA 及序列失去专一性， 当酶
辨认切割位置的能力降低,导致相似的序列或
是错误的辨认序列长度也会作用，而产生错误
的结果.
连杆:化学合成的 8～12 个核苷酸组成的寡核
苷酸片段.以中线为轴两边对称，其上有一种
或几种限制性核酸内切酶的识别序列,酶切后
可产生一定的粘性末端,便于与具有相同粘性
末端的另一ＤNA 片段连接。
底物位点优势效应： 酶对同一个 DNA 底物
上的不同酶切位点的切割速率不同
衔接头：化学合成的寡核苷酸，含有一种以上
的限制性核酸内切酶识别序列。其一端或两端
具有一种或两种内切酶切割产生的黏性末端.
逆转录酶：以 mＲNA为模板合成其互补DＮA。
RNＡ 聚合酶：以 DNA 为模板合成ｍRNＡ,不
需引物,但必须有启动子。末端转移酶:不依赖
于 DＮA 的 DNＡ聚合酶,来自于小牛胸腺组织,
在 DNA 分子的 3�端增加一个或多个脱氧核
苷酸。多核苷酸激酶:对核酸末端羟基进行磷
酸化的酶。
防止载体分子的自身环化作用：使用不同的
限 制 酶 切 ; 碱 性 磷 酸 酶 预 先 处 理 质 粒 载
体;DNA 片段 5’端脱磷酸化作用后连接。;Ｄ
NA 片段末端同聚物加尾后进行连接
载体：指能够运载外源 DＮA 片段（目的基
因）进入受体细胞，具有自我复制能力,使外
源DＮA 片段在受体细胞中得到扩增和表达，
不被受体细胞的酶系统所破坏的一类ＤNA
分子。功能:1 运送外源基因高效转入受体细
胞 2 为外源基因提供复制能力或整合能力 3
为外源基因的扩增或表达提供条
作为工程载体必备的条件：具有多个单一的
限制酶切位点；有复制起点，在受体细胞中
能自我复制,或整合到染色体 DNA 上随染色
体 DNA 的复制而同步复制；具有筛选转化
子的选择性标记基因;安全，不含对受体细胞
有害的基因,不会任意转入受体细胞以外的
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