荧光定量 PCR 的原理及使用
荧光定量 PCR(FQ-PCR)是新近出现的一种定量 PCR 检测方法。其基本特点
是:1、用产生荧光信号的指示剂显示扩增产物的量。2、荧光信号通过荧光染
料嵌入双链 DNA,或双重标记的序列特异性荧光探针或能量信号转移探针等方
法获得,大大提高了检测的灵敏度、特异性和精确性。3、动态实时连续荧光检
测,免除了标本和产物的污染,且无复杂的产物后续处理过程,高效、快速。
下面介绍常用的几种检测方法:
1、 双链 DNA 内插染料
某些染料如 SYBR GreenⅠ 能选择性地与双链 DNA 结合,同时产生强烈荧光。在
PCR 过程中 SYBR GreenⅠ 可与新合成的双链 DNA 结合,产生的荧光信号与双
链 DNA 成正比。
SYBR Green I 荧光染料技术原理 SYBR Green I 是一种只与 DNA 双链结合的荧
光染料。当它与 DNA 双链结合时,发出荧光;从 DNA 双链上释放出来时,荧
光信号急剧减弱。因此,在一个体系内,其信号强度代表了双链 DNA 分子的数
量。SYBR Green 荧光染料法定量 PCR 的基本过程是:1、开始反应,当 SYBR
Green 染料与 DNA 双链结合时发出荧光。2、DNA 变性时,SYBR Green 染料释
放出来,荧光急剧减少。3、在聚合延伸过程中,引物退火并形成 PCR 产物。
4、聚合完成后,SYBR Green 染料与双链产物结合,定量 PCR 系统检测到荧光
的净增量加大。
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