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水稻根系微生物组样本种植及取样和16S 核糖体RNA基因扩增子文库制备方法_yx1
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13页
1. 挑选饱满的水稻种子 2. 使用酒精灭菌 3. 使用次氯酸钠灭菌 4. 使用无菌去离子水清洗 5. 接种至培养基 6. 培养水稻种子 7. 为防止培养基中残
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1
www.bio-protocol.org/exxxx
DOI:10.21769/BioProtoc.xxxx
55555111112000
水稻根系微生物组样本种植及、取样和 16S 核糖体 RNA 基因扩
增子文库制备方法
Cultivation, Samples Collection and 16S RibosomaRibosomal RNA Gene Library
Preparation
Of of Root Microbiota in Rice Root Microbiota Samples
徐浩然
1, 2, 3, 4
,张婧赢
1, 2, 3
,白洋
1, 2, 3, 4,
*
1
植物基因组学国家重点实验室,种子创新研究院,中国科学院遗传与发育生物学研究所,北京;
2
生物
互作卓越创新中心,中国科学院大学,北京;
3
中国科学院-英国约翰英纳斯中心植物和微生物科学联合
研究中心,中国科学院遗传与发育生物学研究所,北京;
4
现代农学院,中国科学院大学,北京
*通讯作者邮箱: ybai@genetics.ac.cn
#
共同第一作者/同等贡献
摘要
自然土壤中生长的植物根系富集了种类繁多的微生物,这些微生物在植物根、根际
组成了根系微生物组并在植物营养吸收(Zhang
等,
2019)和抵抗疾病(Paloma
等,
2018)
等方面发挥着重要功能。本文以水稻为例,从水稻田间种植、根与根际土样本的采集、
16S 核糖体 RNA((rRNA))基因扩增子文库构建等方面介绍了根系微生物组样本的获得
与检测方法,结合 Illumina 测序技术和生物信息学分析可以得到微生物组的结构组成数
据。解析根系微生物组结构组成是阐明植物调控自身根系微生物组的机制以及探索根系
微生物组与植物互作的基础,对于提高植物生产能力具有重要意义。
关键词: 水稻,根系微生物组,种植及,取样,扩增子测序
材料与试剂
次氯酸钠 (Macklin, cat. no. S828471)
乙醇 (SIGMA, cat. no. E7023-500ML)
Murashige Skoog 培养基((含维生素)) (MS, Caisson, cat. no. MSP09)
蔗糖 (HuShi, cat. no. JC-SJ03064)
氯化钠 (NaCl, SIGMA, cat. no. S7653-250G)
磷酸氢二钠 (Na
2
HPO
4
·2H
2
O, SIGMA, cat. no. 04272-1KG)
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DOI:10.21769/BioProtoc.xxxx
55555111112000
磷酸二氢钠 (NaH
2
PO
4
·H
2
O, SIGMA, cat. no. 71504-250G)
琼脂粉 (SIGMA, cat. no. A7921-100G)
土壤 DNA 提取试剂盒(FastDNA
TM
SPIN Kit for Soil, Mpbio, cat. no. 116560200)
无核酸水 (Nuclease-Free Water, Qiagen, cat. no. 129115)
1×TE 缓冲液 (Coolaber, cat. no. SL2081)
PicoGreen DNA 定量试剂盒(Quant-iT™ PicoGreen™ dsDNA Assay Kit, Invitorgen, ca
t. no. P11496)
PrimeSTAR 热稳定 DNA 聚合酶体系 (PrimeSTAR HS DNA Polymerase, TaKaRa, cat.
no. R010A)
琼脂糖 (Biowest, cat. no. G-10)
TAE Buffer (Thermo, cat. no. 15558026)
6×Loading Buffer (RaKaRaTaKaRa, cat. no. 9156)
Beckmen Coulter Agencourt AMPure XP 核酸纯化试剂盒 (Beckman, cat. no. A63880)
琼脂糖电泳凝胶纯化回收试剂盒 (Promega Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up Syste
m, Promega, cat. no. A9282)
核酸电泳染料 (Solarbio, cat. no. G8140)
仪器设备
超净工作台/生物安全柜 (Thermo Fisher Scientific, cat. no. 51025411)
镊子 (Jinzhong, cat. no. JD5020)
三角瓶 (aladdin, cat. no.T4227-500ml-1EA)
130-mm 方形培养皿 (MaiSiNuo, cat. no. HZX064-1)
1-L 试剂瓶 (Cleman, cat, no, CN-600-1000)
Parafilm 封口膜 (Bemis, cat. no. PM-996)
电子天平 (Mettler Toledo, cat. no. AL104)
高压蒸汽灭菌锅 (PHCbi, cat. no. MLS-3781-PC)
50-mL 离心管 (BD Falcon, cat. no. 352070)
剪刀 (Jinzhong, cat. no. J21130)
高速离心机 (Eppendorf, model no. 5810R)
平板摇床 (Kylin-Bell Lab Instruments, model no. TS-2)
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3
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DOI:10.21769/BioProtoc.xxxx
55555111112000
滤纸 (SEP, cat. no. DXLZ11F)
微量离心管 (1.5-, 2-, 5-mL; Eppendorf, cat. nos. 0030125150, 30123344, 30119401)
单道移液器 (10, 20, 100, 200, 1000 µL; Eppendorf, cat. nos. 3120000020, 312000003
8, 3120000046, 3120000054, 3120000062)
12 通道移液器 (10, 100, 300 µL; Eppendorf, cat. nos. 3122000027, 3122000043, 3122
000060)
移液器枪头 (nuclease-free, 10, 200, 1000 µL; Axygen, cat. nos. T-300, T-200-Y, T-10
00-B)
旋涡混合器 (ZangHan, cat. no. VM100)
金属水浴锅 (Dry Baths, Thermo, cat. no. 88870011)
破碎仪 (Mpbio FastPrep-24TM, Mpbio, cat. no. MPFastPrep-24 5G)
高速微型离心机 (Thermo Fisher Scientific, model no. Heraeus Pico 17)
紫外分光光度计 (Thermo Fisher Scientific, model no. NanoDrop ND-3300)
96 孔 PCR 板 (Jet Keen Biotechnology, cat. no. PC-0200-9B)
96 孔酶标板 (Costar, cat. no. 3590)
酶标仪 (Molecular Devices®, model no: PARADIGM)
96 孔 PCR 板封板膜 (Axygen, cat. no. PCR-TS)
PCR 仪 (T100TM; BIO-RAD, model no. 1861096)
电泳仪 (JUNYI-DONGFANG, cat. no. JY300HC)
凝胶成像仪 (BIO-RAD, model no. Universal Hood II)
切胶刀片 (Jinzhong, cat. no. J11010)
磁力架 (Invitrongen DynaMag™-96 Side Magnet, Invitrongen DynaMag™-2 Magne, In
vitrongen, cat. nos. 12027, 12321D)
–80°C 超低温冰箱 (Thermo Fisher Scientific, model no. 907)
–20°C 冰箱 (Haier, cat. no. DW-40L92)
实验步骤
一、种子消毒、萌发及移栽
注:以下实验需在超净台内完成。
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