论文研究 - 从红雪蟹表皮分离的几丁质脱乙酰基酶的分子克隆和系统发育分析

几丁质脱乙酰基酶（CDA; EC 3. 5. 1. 41）催化几丁质脱乙酰基作用。 在这项研究中，我们成功地从红色雪蟹Chionoecetes japonicas克隆了几丁质脱乙酰酶基因并对其进行了测序。 通过使用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）以及cDNA末端的5'和3'快速扩增，我们从粳稻的表皮中获得了一个2141 bp的扩增子，其中含有几丁质脱乙酰基酶基因（CjCDA）。 扩增子包含一个1575 bp的开放阅读框，预计可编码525个氨基酸。 由推导的氨基酸序列预测的结构包括N端信号肽，几丁质结合结构域（CBD），低密度脂蛋白受体A类结构域（LDL-A）和催化结构域。 CjCDA推导的氨基酸序列的比较分析显示，与Cherax quadricarinatus的胃石蛋白59具有最高的同源性（74％）。 我们使用RT-PCR来评估CjCDA在粳稻各种组织中的表达，并且我们观察到CjCDA仅在表皮中表达。 系统进化分析，使用CjCDA和其他已知的几丁质脱乙酰基酶的氨基酸序列，表明CjCDA属于甲壳类甲壳质脱乙酰基酶的一组。 据我们所知，这是第一项报道螃蟹几丁质脱乙酰基酶cDNA克隆的研究