建立了检测东海原甲藻线粒体细胞色素 b(Cytb)基因 mRNA含量的实时荧光定量 PCR方法。以甲藻 Cytb基 因的简并引物扩增得到984 bp长的东海原甲藻 Cytb基因片段,经克隆、测序,制备并纯化质粒。以光度法测定质粒浓度 并作为标准品。对上述基因片段,利用 PRIMER EXPRESS3 .0设计引物,以梯度稀释的质粒标准品进行定量 PCR反应,以 SYBR Green I为荧光染料,制作标准曲线,得到基因拷贝数 X与 Ct值的关系为 :Ct= -3 .50 lg X+39 .35(相关系数
