基因工程技术与应用知识点.doc

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基因工程的定义：按照预先设计好的蓝图，

利用现代分子生物学技术，特别是酶学技术，

对遗传物质 DNA 直接进展体外重组操作与改

造，将一种生物〔供体〕的基因转移到另外

一种生物〔受体〕中去，从而实现受体生物

的定向改造与改进。

基因工程的根本过程：切、接、转、增、检

的操作，以改进品质或创造新品种。包括细

胞工程和基因工程等不同的技术层次。

克隆。指由同个祖先经过无性繁殖式得到的

一群由遗传上同一的 DNA 分子、细胞或个体

组成的特殊生命群体。

限制性核酸切酶。是一类能识别双链 DNA 中

特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二

酯键断开的脱氧核糖核酸酶。

限制性 切 酶由三 个 基因位 点 所控制 ： hsd

R---限制性切酶， hsd M---限制性甲基化酶，

同裂酶:不同来源的限制酶具有一样的识别位

点和切割位点。同尾酶：来源不同、识别序

列不同，但产生一样粘性末端的酶

粘性末端：DNA 末端一条链突出的几个核苷

酸能与另一个具有突出单链的 DNA 末端通过

互补配对粘合，这样的 DNA 末端，称之。

酶活性单位。在适宜的温度和缓冲液中，在

50μl 反响体系中，1 小时完全切割 1 微克

DNA 所需的酶量为 1 个酶活性单位 U。

星活性：指限制性切酶在非标准条件下，对

与识别序列相似的其它序列也进展切割反响，

导致出现非特异性的 DNA 片段的现象。引起

星活性原 因：假设 使用 bu"er 不当, 会有

star activity，而 star activity 是指限制酶

对所作用的 DNA 及序列失去专一性, 当酶识

一种或几种限制性核酸切酶的识别序列，酶

切后可产生一定的粘性末端，便于与具有一

逆 转 录 酶 ： 以 mRNA 为 模 板 合 成 其 互 补

DNA。RNA 聚合酶：以 DNA 为模板合成

mRNA，不需引物，但必须有启动子。末端

转移酶：不依赖于 DNA 的 DNA 聚合酶，来

自于小牛胸腺组织，在 DNA 分子的 3端增

加一个或多个脱氧核苷酸。多核苷酸激酶：

对核酸末端羟基进展磷酸化的酶。

限制酶切；碱性磷酸酶预先处理质粒载体

DNA 片段 5’端脱磷酸化作用后连接。；

DNA 片段末端同聚物加尾后进展连接

载体：指能够运载外源 DNA 片段〔目的基

因〕进入受体细胞，具有自我复制能力，

使外源 DNA 片段在受体细胞中得到扩增和

表达，不被受体细胞的酶系统所破坏的一

转入受体细胞 2 为外源基因提供复制能力

或整合能力 3 为外源基因的扩增或表达提

供条