ELISA的原理与应用PPT课件.pptx

ELISA，全称为酶联免疫吸附剂测定，是一种基于抗原和抗体反应的免疫测定技术。该技术在1971年首次建立，利用酶的催化作用和抗原抗体的特异性结合，来检测和定量样本中的特定物质，如蛋白质、小分子抗原或抗体。ELISA具有高灵敏度和特异性，广泛应用于临床检验、疾病诊断和科研领域。 ELISA的基本原理主要分为以下几个方面： 1. **抗原抗体反应**： - **可逆性**：抗原和抗体之间的结合是动态平衡的，可以形成抗原抗体复合物，并且这种结合可以解离，保持各自的活性。 - **特异性**：抗原与抗体的结合具有高度特异性，取决于它们决定簇间的化学结构和空间构型的互补性。 - **最适比例**：抗原和抗体之间存在一个最佳结合比例，超出这个比例，结合效率会下降。 - **敏感性**：通过酶反应，ELISA的敏感度大大提高，可检测到ng/ml甚至更小的浓度水平。 2. **ELISA的类型**： - **双抗体夹心法**：适用于检测大分子抗原，如HBsAg、HBeAg等，通过两种不同的抗体分别固定在固相载体和酶结合物上。 - **双抗原夹心法**：用于检测抗体，两份相同抗原分别用于固相包被和酶标记，标本中的抗体与之结合。 - **间接法**：通过包被抗原检测抗体，标本中的抗体与固相抗原结合，再用酶标记的抗抗体检测。 - **竞争法**：用于检测抗原或抗体，当标本中的抗原与酶标记的抗原竞争结合固相抗体，根据显色深浅判断标本抗原含量。 - **捕获包被法**：常用于检测IgM抗体，抗人IgM抗体包被固相，捕获血清中的IgM。 - **ABS-ELISA法**：结合生物素-亲和素系统，提高检测的敏感性和特异性。 3. **ELISA试剂**： - **免疫吸附剂**：通常是固相载体，如聚苯乙烯微孔板，其表面包被有抗原或抗体。 - **结合物**：包含酶标记的抗原或抗体，酶可以是辣根过氧化物酶（HRP）等，用于放大信号。 - **酶的底物**：如DAB，在酶的催化下发生颜色变化，用于视觉检测。 ELISA在临床检验中的应用非常广泛，可以用于检测多种疾病标志物，如乙型肝炎、艾滋病、自身免疫疾病等的抗体或抗原，提供诊断依据。此外，ELISA还被广泛应用于食品安全、环境污染物监测等领域。 总结来说，ELISA是一种强大的免疫测定工具，通过抗原抗体反应和酶催化放大，实现对样本中目标分子的高敏感度和高特异性检测。其多种变体使得它能够适应各种不同的检测需求，是现代医学和生物学研究不可或缺的技术之一。