ELISA原理方法操作及注意事项PPT课件.pptx

ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，酶联免疫吸附测定）是一种广泛应用于生物医学领域的免疫检测技术，特别是在传染病、寄生虫病和非传染病的免疫诊断中。该方法基于抗原和抗体之间的特异性结合，以及酶标记的抗原或抗体与底物之间的催化反应，从而实现对目标物质的定性和定量分析。 **ELISA的基本原理：** ELISA的核心是将抗原或抗体固定在固相载体（通常为聚苯乙烯微孔板）上，保持其免疫活性。然后，待测样本（含有抗原或抗体）与固相载体上的抗原或抗体结合。经过洗涤步骤去除未结合的物质，再加入酶标记的抗原或抗体，它们会与固相上的抗原或抗体结合。加入底物，酶催化底物转化为有色产物，颜色深浅与样本中目标物质的含量成正比，从而实现检测。 **ELISA的类型：** 1. **双抗体夹心法**：适用于检测二价或以上的大分子抗原，但不适用于小分子抗原，因为小分子无法形成稳定的双位点夹心。 2. **双抗原夹心法**：与双抗体夹心法相似，但用酶标记的抗原替代酶标记的抗体，用于检测抗体，敏感度较高。 3. **间接法**：主要用于测定病原体抗体，需要纯化抗原以提高特异性。为减少非特异性结合，通常需要预包被无关蛋白，并对样本进行稀释。 4. **竞争法**：当抗原纯化困难或存在干扰物质时，可用于检测抗体或抗原。小分子物质如激素和药物通常使用这种方法，样本与固定量的酶标记抗原竞争结合固相上的抗体。 **操作注意事项：** - 抗原或抗体的纯度至关重要，纯化能提高实验的特异性，减少假阳性。 - 特异性抗体的检测需要防止非特异性IgG的干扰，这可以通过预包被无关蛋白来封闭固相载体上的空隙。 - 适当样本稀释可降低阴性本底的影响，确保结果准确。 - 酶标抗原的制备是双抗原夹心法的关键，需根据抗原特性选择合适的标记方法。 - 竞争法中，样本和酶标记抗原的竞争反应需要精确控制，以确保结果的可靠性。 ELISA的高效、灵敏和易自动化使其成为实验室诊断的常用工具。不过，操作过程中必须严格遵守每一步的细节，以保证实验结果的准确性。此外，对于不同的检测目标和样本类型，选择合适的ELISA方法是至关重要的。