氨基酸的分离鉴定-滤纸层析法.ppt

【氨基酸的分离鉴定-滤纸层析法】是一种在教学环境中常见的生物学实验技术，用于分析和鉴别不同的氨基酸。这项技术基于层析法的基本原理，利用滤纸作为支持介质，通过溶剂系统的移动来分离混合物中的氨基酸。 **基本原理** 纸层析法是一种分配层析技术，滤纸作为惰性支持物，其中的水分（被滤纸纤维吸附）作为固定相，而有机溶剂（如正丁醇、甲酸和水的混合物）作为流动相。当氨基酸溶液点在滤纸上后，随着流动相的上升，氨基酸在固定相和流动相之间不断进行分配。由于不同氨基酸在两相中的分配系数不同，它们在滤纸上的移动速度也各异，最终形成不同距离的层析点。这个距离与原点的距离之比称为Rf值（比移值），是衡量氨基酸在层析过程中移动程度的参数。 **显色原理** 氨基酸在纸层析图谱上通常是无色的，可以通过紫外光照射或显色法来鉴定。在本实验中，采用茚三酮作为显色剂。茚三酮与氨基酸反应后会产生颜色，使得氨基酸的位置可见。通过喷雾器均匀地喷上茚三酮丙酮溶液，再在烘箱中烘烤，可以清晰地看到各氨基酸的层析斑点。 **实验器材与试剂** 实验所需的主要器材包括玻璃钟罩、毛细管、喷雾器、培养皿、层析滤纸、烘箱、铅笔和直尺、裁纸刀、一次性手套、分液漏斗、吹风机和移液管等。试剂主要包括氨基酸溶液（如赖氨酸、亮氨酸、天门冬氨酸和丙氨酸）、扩展剂（正丁醇、甲酸和水的混合物）以及显色剂（茚三酮丙酮溶液）。 **实验步骤** 1. 准备滤纸：根据要求标记点样位置。 2. 点样：使用毛细管点样，确保样品自然风干。 3. 展层：将滤纸制成筒状并置于培养皿中，加入展开剂至一定高度，待溶剂前沿上升至特定位置后取出。 4. 显色：用茚三酮丙酮溶液喷雾，然后烘烤显色。 5. 计算Rf值：根据层析斑点位置确定氨基酸的Rf值。 **注意事项与思考** 实验中需戴手套以保护皮肤，滤纸应妥善保存以防止污染。避免“拖尾”现象需要注意点样的浓度、展层速度的控制以及样品与展开剂的接触。氨基酸在滤纸上的分布差异反映了它们的化学特性。如果选择其他氨基酸，其Rf值会根据它们在两相中的分配系数变化，从而导致不同的层析图案。 通过这个实验，学生可以学习和理解层析法的基本原理，掌握操作技巧，并进一步了解氨基酸的物理化学性质。实验过程中的观察和思考有助于培养实验技能和科学思维。