"生化与分子生物学实验指导"
生化与分子生物学实验指导是生物化学实验课的重要组成部分，旨在指导学生学习和掌握生物化学实验的基本原理和操作方法。本文档提供了两个实验的指导，实验一：氨基酸纸层析法，实验二：甲醛滴定法测定氨基氮。
实验一：氨基酸纸层析法
氨基酸纸层析法是一种常用的生物化学实验技术，用于鉴定和测定氨基酸混合物。该实验的目的是通过氨基酸的别离，了解层析法的根本原理和操作方法。
实验原理：纸层析法是生物化学上别离、鉴定氨基酸混合物的常用技术。该方法使用滤纸作为支持物，展层溶剂大多由水和有机溶剂组成。溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。在展层过程中，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进展分配，形成距原点距离不等的层析点。
实验方法：
1. 滤纸准备：选用新华 1 号滤纸，裁成 5cm×20cm 的长方形，在距纸一端 2cm 处用铅笔轻轻划一基线，在线上每隔 1cm 作一记号，标出 4 个原点。
2. 点样：用毛细管将氨基酸样品分别点于原点（用量 10~20uL），用吹风机稍加吹干后再点下一次，重复 2～3 次，点子直径不能超过 3mm。
3. 展层：将点好样的滤纸放入装有展层剂的展层缸盖展层缸进展展层，展层剂液面不能淹没原点基线，当溶剂上升至 15~20cm 时，取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿线，把滤纸烘干。
4. 显色：用喷雾器在滤纸上均匀喷上显色剂，用热风吹干，层析斑点即可显现。
5. 结果：用铅笔轻轻描出显色斑点的形状，并用一直尺度量每一显色斑点中心与原点之间的距离和原点到溶剂前沿的距离，计算各色斑的 Rf 值，与标准氨基酸的 Rf 值对照，确定混合物中含有哪些氨基酸。
实验二：甲醛滴定法测定氨基氮
实验目的：初步掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点。
实验原理：氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：－NH3 是弱酸，完全解离时 PH 为 11－12 或更高，假设用碱滴定－NH3 所释放的 H＋来测定氨基酸，一般指示剂变色域小于 10，很难准确指示滴定终点。常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使－NH3 释放 H＋，使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域〔PH9.0 左右〕。因此可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。
实验方法：
1. 准确称取 375mg 甘氨酸，溶解后定容至 100ml。
2. 准备 0.05mol/L 标准甘氨酸溶液和 0.02mol/L 标准氢氧化钠溶液。
3. 用 3ml 微量滴定管精确测定氨基氮含量。
生化与分子生物学实验指导的目的是为了让学生掌握生物化学实验的基本原理和操作方法，从而更好地理解和应用生物化学知识。
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