Taqman探针及SYBR Green I荧光染料技术PPT课件PPT学习教案.pptx

荧光定量PCR技术是分子生物学领域中用于检测和定量特定DNA序列的重要方法，其中TaqMan探针技术和SYBR Green I荧光染料技术是最常见的两种。这两种技术都是基于PCR反应的扩增过程来实现靶基因的实时检测。 TaqMan探针法是一种高度特异性的定量PCR技术。其主要原理是利用Taq酶的5'→3'外切核酸酶活性，在PCR过程中切断带有荧光报告基团和淬灭基团的探针。探针与模板DNA特异性结合，5'端标记的报告基团在未切割时，其荧光被3'端的淬灭基团吸收，无荧光信号。随着PCR循环的进行，Taq酶在延伸过程中切割探针，报告基团与淬灭基团分离，释放出荧光信号。这种荧光信号的增长与模板DNA的拷贝数同步，从而可以定量分析模板DNA的初始量。 TaqMan探针有普通和MGB（Minor Groove Binder）两种类型。MGB探针在3'端使用非荧光淬灭基团，降低了背景信号，并通过连接MGB修饰基团提高探针的熔解温度（Tm值），使探针设计更短，降低成本且提高设计成功率，尤其适用于A/T丰富的模板。 相比之下，SYBR Green I荧光染料技术较为简单且成本较低。它是一种能与所有DNA双链结合的染料，当与DNA结合时发出荧光。在PCR过程中，DNA的变性、复性和延伸步骤决定了染料与DNA的结合状态，从而通过监测荧光信号变化来追踪PCR产物的积累。然而，由于SYBR Green I对模板无选择性，可能导致非特异性结合，对引物设计和PCR反应条件的要求较高，以确保结果的准确性。 这两种技术在实时定量PCR仪中应用广泛，常规PCR仪无法实现实时监测，而实时定量PCR仪则能够实时记录荧光信号，提供精确的定量数据。在实际实验中，根据研究需求和实验条件，可以选择适合的荧光定量PCR技术进行基因表达分析、病原体检测或基因突变分析等。