一、原理概述
1.Real-Time PCR 概论
实时荧光定量 PCR 技术于 1996 年由美国 Applied Biosystems 公司推出,由于该技术
不仅实现了 PCR 从定性到定量的飞跃,而且与常规 PCR 相比,它具有特异性更强、有效解
决 PCR 污染问题、自动化程度高等特点,目前已得到广泛应用。
实时荧光定量 PCR :在 PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整
个 PCR 进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方
法。
定量 PCR 仪是在普通 PCR 仪的基础上加装了荧光激发装置和荧光检测装置, PCR 扩增和检
测同时进行,最终结果不需进行电泳检测,所以有效地避免了样品间的交叉污染。
常 规 PCR 技术:对 PCR 扩增反应的终点产物进行定量和定性分析,无法对起始模板
准确定量,无法对扩增反应实时检测。
实时定量 PCR 技术:利用荧光信号的变化实时检测 PCR 扩增反应中每一个循环扩增产
物量的变化,通过 Ct 值和标准曲线的分析对起始模板进行定量
分析。
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