DNA电泳是生物学实验中常用的一种技术,用于分离和分析DNA分子。在进行DNA电泳时,需要用到一系列的试剂和缓冲液。以下是一些关键的试剂和缓冲液的配制方法:
1. **10mg/ml EB (溴化乙锭)**:EB是一种常用的DNA染料,但具有强致癌性。配制时,需要谨慎操作。称取1g EB固体到专用容器中,加入100ml双蒸水,搅拌直至完全溶解,然后转移到棕色瓶中,4℃避光保存。
2. **EB缓冲液**:该缓冲液由890mM Tris-H3BO3和20mM EDTA组成,pH值为8.3。配制时,称取相应量的Tris碱、EDTA或Na2EDTA·2H2O、H3BO3,溶解于约700ml双蒸水中,调整pH至8.3,最后定容至1L。
3. **5× TBE缓冲液**:含有2M Tris-HAc和100mM EDTA,pH值为8.5。配制时,称取Tris碱和EDTA,加入双蒸水溶解,再添加HAc调节pH至8.5,最后定容至1L。
4. **50× TAE缓冲液**:包含10mM EDTA、50%丙三醇和0.25%溴酚蓝,pH值为8.5。配制时,使用移液器量取所需成分,加入双蒸水,最后4℃保存。
5. **10× 上样缓冲液(Loading Buffer)**:含有30mM EDTA、36%丙三醇和0.05%溴酚蓝,pH值为7.0。配制方法与50× TAE类似,但需用NaOH调整pH至7.0。
6. **过硫酸铵(APS)**:10%(W/V)的浓度,用于引发聚合反应。配制时,称取5g过硫酸铵,加水定容至50ml,分装于1.5ml离心管中,-20℃保存。
7. **溴酚蓝**:1%(W/V)浓度,作为指示剂。可配制成100ml溶液,先称取1g溴酚蓝溶于约80ml双蒸水,定容至100ml,避光4℃保存。
8. **0.5M EDTA(pH=8.0)**:配制时,在800ml蒸馏水中加入186.1g EDTA-Na2·2H2O,搅拌至乳白色后用NaOH调pH至8.0,定容至1L,高压灭菌。
9. **5 X TBE**:包含Tris碱、硼酸和0.5M EDTA,配制时需要称取相应成分,加水定容,并可选择是否高压灭菌。
10. **1 X TBE**:由5 X TBE和蒸馏水按1:4比例稀释得到。
11. **30%(W/V) 丙烯酰胺储液**:主要用于DNA电泳凝胶的制备。称取丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺,加入双蒸水,过滤除杂后4℃保存。
以上就是DNA电泳实验中所需试剂和缓冲液的基本配制方法,确保了实验的顺利进行。在实际操作中,务必注意安全,尤其是处理有害物质如EB和丙烯酰胺时。同时,保持实验室环境的清洁和良好的通风条件也非常重要。