人内皮细胞在香烟烟雾提取物作用下细胞色素C氧化酶活性及细胞凋亡的变化资源-CSDN文库

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人内皮细胞在香烟烟雾提取物作用下细胞色素 C 氧化

酶活性及细胞凋亡的变化

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刘彩虹，陈平，裴艳芳，蔡珊，向旭东

中南大学湘雅二医院呼吸内科，长沙 (410011)

E-mail: chenping101@hotmail.com

摘要：目的探讨香烟烟雾提取物（cigarette smoking extract, CSE）对内皮细胞细胞色素 C

氧化酶（cytochrome c oxidase, COX）活性及凋亡的影响。方法体外培养 ECV304，分别给

予 0%、0.5%、1%、5%CSE 刺激 12h，及 5%CSE 刺激 0h、6h、12h、24h 后，生化法检测

COX 活性；流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果 CSE 引起 COX 活性下降，且随着刺激浓

度和时间的增加而下降（P＜0.05）；流式细胞仪结果示不同浓度 CSE 分别作用 12h 后凋亡

率依次增高，除 0%CSE 组和 0.5%CSE 组间比较无统计学意义（P＞0.05），余各组间比较均

有统计学意义（P＜0.05）；5%CSE 作用不同时间后，随着干预时间的延长细胞凋亡率逐渐

升高（P＜0.05）。结论 CSE 抑制内皮细胞 COX 活性，呈浓度和时间依赖性；CSE 诱导内

皮细胞凋亡，呈浓度和时间依赖性；COX 活性的下降可能在 CSE 所致的内皮细胞凋亡中具

有重要作用。

关键词：香烟烟雾；内皮细胞；细胞色素 C 氧化酶；凋亡

0.引言

COPD 是严重影响人类健康的常见病、多发病、且发病率和死亡率逐年增高，然而目前

该病发病机制不明且无理想的治疗方法，因此研究其发病机制从而找到有效的治疗方法迫在

眉睫。吸烟被认为是慢性阻塞性肺疾病（COPD）的最主要的致病因素，有研究

[1]

表明细胞

凋亡参与了 COPD 的形成。近年来发现 COX 活性与细胞凋亡关系极为密切。本研究通过香

烟烟雾提取物（CSE）直接刺激内皮细胞，观察 CSE 对内皮细胞 COX 活性及细胞凋亡的影

响。探讨内皮细胞 COX 及细胞凋亡在吸烟所致肺部疾病中的作用。

1. 材料与方法

1.1 材料

人脐静脉内皮细胞株

ECV304

，购至中南大学湘雅湘雅医学院中心实验室；

1640

培养基、

新生小牛血清购至

Gibco

公司；细胞可溶性总蛋白制备试剂盒（产品编号为

GMS30002.1

）

及细胞

/

组织悬液细胞色素

C

氧化酶活性测定试剂盒（产品编号为

GMS10014.3

）购至上海

杰美基因医药科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 CSE 的制备

一支去过滤嘴燃烧的香烟（芙蓉牌，湖南常德卷烟厂生产）由负压吸引器连续抽吸，烟

雾经出口通入 20ml 无血清 1640 培养液中形成悬液，悬液用 NaOH 调至 PH7.4，经过滤形成

CSE 原液，配置好的 CSE 于 1h 内用于实验。用无血清培养液稀释成不同浓度，公式为：

CSE 浓度=CSE 原液体积/总体积×100%。分别配置成 0.5%、1%和 5%的 CSE 用于试验。

1

本课题得到教育部博士点基金肺血管内皮细胞启动吸烟肺气肿发病机制的研究(20050533023)的资助。

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