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采用PCR技术人工合成了一段长约175bp的人表皮生长因子(hEGF)的基因片段。为了便于克隆,在该片段的5端设计了Pst Ⅰ的酶切位点及与pUSl86载体signal sequence相连接的碱基部分,在3’端设计了Hind Ⅲ的酶切位点及终止密码子。经DNA测序分析,合成的片段与已发表的hEGF在序列上完全一致;之后将其克隆至枯草杆菌分泌型质粒载体pUS186上,构建重组载体pUSE并转化一株枯草杆菌突变菌株BS9920感受态细胞;以PCR法快速筛选重组菌落,RIA检测结果表明BS9920阳性转化子能
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weixin_38624556
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