人粒细胞集落刺激因子cDNA的克隆与表达 (1993年)

用脂多糖诱导正常人外周血单核细胞使产生粒细胞集落刺激因子。从诱导细胞中提取出总RNA,以特异引物经逆转录PCR扩增出粒细胞集落刺激因子mRNA的cDNA,将其插入经改造的分泌型表达载体pIN-omp A,并转化受体菌E.coli。克隆的cDNA通过限制性酶双酶切和3′端、5′端及中间序列探针分子杂交鉴定,结果与预期一致。表达质粒在大肠杆菌中经IPTG诱导,粒细胞集落刺激因子被分泌到细菌的周质中。产物提取后,用双单抗夹心ELISA法检测具有粒细胞集落刺激因子的免疫活性。