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核酸杂交技术PPT学习教案.pptx
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会计学
1
核酸杂交技术
第一节 核酸杂交的概念
和原理
一、基本原理:
DNA
的变性和复性。
1
、变性:在热变性过程
中,
DNA
双螺旋被解开
一半时的温度称为变性
温度或解链温度
(
melting-
temperature, Tm
)。
(
1
)解链温度
Tm
:
每一种
DNA
都有一个解
链温度,通常
Tm
值在
60
℃
。
第
1
页
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共
69
页
(
2
)影响
Tm
值的因素:
①
DNA
碱基组成:
G
-C
含量越多,
Tm
值越高;
②
溶液的离子强度:低离
子强度,
Tm
值较低,
而且解链的温度范围较
宽;高离子强度,
Tm
值较高,解链温度较窄。
③
pH
值:溶液
pH
值在
5
~
9
范围内,
T
m
值
变化不明显。
④
变性剂:各种变性剂主
要干扰碱基堆积力和氢
键的形成而降低
Tm
值。
T
m
=
0.41×(G
+
C)%
+
第
2
页
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69
页
2
、复性:
变性的
DNA
两条
互补单链,
在适当条件下重新缔
合成双
链的过程为
DNA
复性。
核酸杂交技术就是利
用
DNA
变性再复性的原理,
进行的
一项核酸检测技术。
杂交分子可以在
DNA
和
DNA
、
DNA
和
RNA
、
RNA
和
RNA
以及
人
工合
成的寡
核苷
酸单
链与
R
N
A
或
D
N
A
单
链
之
间形成
杂交
分子。
第
3
页
/
共
69
页
二、核酸杂交的概念
核酸分子杂交
(
nu
cleic acid
hybridization)
是指具有互
补序列的两条核酸单
链在一
定条件下按碱基配对
原则形
成双链的过程。
通过将标记的已知核
酸片段
作为
探针
,与
待测标本核酸
进行杂交反应,即可
观察到
样本核酸中相应的基
因。
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4
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