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核酸杂交技术PPT课件.pptx
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第一节 核酸杂交的概念和原理
一、基本原理:
DNA
的变性和复性
。
1
、变性:在热变性过
程中,
DNA
双螺旋被解开
一半时的
温度称为变性温
度或解链温
度(
melting-
tempe
ratur
e
, Tm
)。
(
1
)解链温度
Tm
:每一
种
DNA
都有一个解链温度
,
通常
Tm
值在
60℃
。
第
1
页
/
共
69
页
(
2
)影响
Tm
值的因素:
①DNA
碱基组成
:
G
-C
含
量越多,
Tm
值越高;
②
溶液的离子强度:
低离
子强度,
Tm
值较低,而
且解链的温度
范围较宽;
高离子强度,
Tm
值较高,
解链温度较窄
。
③ pH
值:溶液
pH
值在
5
~
9
范围内,
Tm
值变化
不明显。
④
变性剂:各种变性
剂主
要干扰碱基堆
积力和氢键
的形成而降低
Tm
值。
T
m
=
0.41×(G
+
C)%
+
第
2
页
/
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69
页
2
、复性:
变性的
DNA
两条互补
单链,在适当条
件下重新缔合成双链的过
程为
DNA
复性
。
核酸杂交技术就
是利用
DNA
变性再复性的原
理,进行的一项
核酸检测技术。
杂交分子可以在
DN
A
和
DNA
、
DNA
和
R
NA
、
RNA
和
RNA
以及
人工合成的寡
核苷酸单链与
RN
A
或
DNA
单链之间形成杂
交分子。
第
3
页
/
共
69
页
二、核酸杂交
的概念
核酸分子杂交
(nu
cleic acid hyb
ridization)
是指具有互补
序列的两条核酸单链在
一定条件下按
碱基配对原则形成双链的
过程。
通过将标记的
已知核酸片段作为
探针,与
待测标本核酸进行杂交
反应,即可观察到
样本核酸中相
应的基因。
第
4
页
/
共
69
页
根据检测对象
和手段不同可将杂交枝术
分为不同类型,
常见的有四种类型
Sou
ther
n
印迹杂交(
DNA
印迹杂
交)
North
ern
印迹杂交(
RNA
印迹杂交)
原位杂交技
术(
in situ hyb
ridization
)
斑点及狭缝
杂交
(dot blot
hybridization)
根据杂交体系
的不同,核酸杂交可以分
为液相杂交和固
相杂交。
①
固相杂交是将
待测核酸先固定
在固相支持物上
,
然后与溶液中
的游离探针进行
杂交,形成的杂
交
体结合在固相
支持物上。
第
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