基因工程-03-基因工程的载体PPT幻灯片.ppt

基因工程的载体是基因工程中的核心工具，它们承担着将目的基因送入受体细胞并在细胞内稳定表达的任务。在本篇内容中，我们将详细探讨几种常见的基因工程载体。 质粒载体是最常用的一类载体，它们是细菌细胞中自主复制的环状DNA分子，非宿主生存所必需，但能赋予宿主某些有益特性，如抗生素抗性。质粒大小不一，从1到200千碱基对（kb）不等，且在细菌中广泛存在。例如，UC18/19和T载体系列是常用的E.coli质粒载体。质粒作为基因工程载体，需要具备几个关键特征：复制起点，使得其能在受体细胞中复制；筛选标记，帮助识别和选择成功转化的细胞；以及限制性内切酶切割位点，便于外源DNA片段的插入。 噬菌体载体，如λ噬菌体，是基于噬菌体的DNA分子，通常用于E.coli细胞。它们可以是线性的，如EMBL系列和λgt系列，或环状，如噬菌粒。这些载体在DNA包装和感染宿主细胞方面有独特的机制。 再者，柯斯质粒载体（Cosmid）结合了质粒和λ噬菌体的特性，允许插入较大的DNA片段，通常小于45kb。它们含有λ噬菌体的cos序列，使得DNA能被λ噬菌体的包装机制处理。 人工染色体载体，如BAC（细菌人工染色体）和YAC（酵母人工染色体），则适用于插入非常大的DNA片段，分别可以容纳大约300kb和100到2000kb的DNA。MAC（哺乳动物人工染色体）则是为哺乳动物细胞设计的，可以插入超过1000kb的DNA。 此外，还有针对特定功能的载体，如克隆载体、表达载体和整合载体。克隆载体主要用于纯化和储存基因，表达载体则含有启动子和终止子，确保目的基因在宿主细胞中得到转录和翻译，而整合载体设计用于将目的基因整合到宿主细胞的染色体上。 病毒载体，如SV40载体和昆虫杆状病毒载体，主要用于动物细胞，特别是表达目的蛋白。还有一些穿梭载体，如pSVK3质粒，可以在动物细胞和细菌之间穿梭。 总结来说，基因工程载体的选择取决于实验需求，包括目的基因的大小、宿主细胞类型以及期望的表达水平。每种载体都有其独特的优点和适用范围，理解这些特性对于有效地进行基因操作至关重要。