基因工程载体XXXX.pptx

基因失活 ) 通常涉及将外源 DNA 片段插入到载体上的抗性基因中，导致该基因功能丧失，从而使宿主细胞仅对一种抗生素敏感。例如，在质粒 pBR322 中，原本含有抗四环素和氨苄青霉素的基因，如果外源基因插入到抗四环素基因，宿主细胞就只能抵抗氨苄青霉素，通过在含四环素的培养基上生长，可以筛选出成功插入了外源 DNA 的细胞。 第五节 大肠杆菌表达载体大肠杆菌表达载体是专门设计用于在大肠杆菌中高效表达目的基因的载体。它们不仅包含复制子，还需要一个强启动子，以确保目的基因在宿主细胞内被高效转录。此外，表达载体可能还包含调节元件，如启动子、终止子、以及编码蛋白质翻译调控元件，如 Shine-Dalgarno 序列，这些元素有助于目标蛋白质的合成和稳定。 1. 表达策略：原核表达系统通常采用诱导表达，即使用诱导剂（如 IPTG）激活启动子，启动目的基因的转录。此外，还可以选择弱启动子进行组成型表达，使得目的基因在没有诱导剂的情况下也持续表达。 2. 胞内表达和分泌表达：胞内表达载体使得目标蛋白质在细胞质中积累，而分泌表达载体则使蛋白质通过细胞膜分泌到细胞外，便于后续纯化。 3. 真核表达载体：对于在真核细胞中表达目的基因，需要考虑更复杂的调控机制，包括剪接信号、内含子、启动子、终止子以及翻译调控序列。这些载体通常用于哺乳动物细胞、酵母或其他真核细胞系统。 基因工程载体的选择取决于实验目标，如需要大量生产重组蛋白、建立基因文库或进行功能研究。在实际操作中，载体的设计和优化是基因工程中不可或缺的一部分，这涉及到对载体特性的深入了解，包括其分子大小、拷贝数、遗传标记和兼容性等，以确保目的基因在目标细胞中的有效克隆和表达。