地高辛标记寡核苷酸，荧光标记二抗， ISH，冰冻切片操作过程：
1、 多甲固定：应尽量在半个小时内完成。（固定时间以 24-36 小时为宜，避免 RNA
降解或固定过度。）
2、 切片 :为获得高杂交信号，冰冻切片应切成 10um-20um。（选用 16um）（切好的片
子可以保存在 -70 度中）但是要注意，保存在 -70 度中的切片，拿出来以后，立即在
4%的多甲中重新固定，避免在重新固定前切片恢复室温。（重新固定 10-15min）
3、 用 0.1MPB 洗切片 3*5min
4、 切片放入 100%乙醇 5min，空气中干燥。
杂交液：（ 20ml） 藏于 -20 度
20*SSC 4ml
硫酸葡聚糖 4g
去离子甲酰胺 10ml
将他们溶解后，加入以下物质：
Poly A（10mg/ml） 0.5 ml
SsDNA（10mg/ml） 0.5 ml
tRNA （10mg/ml） 0.5 ml
DTT (1M) 2ml
50*Denhardts 0.2ml
上述溶液可以配置后长期贮藏与 -20 度中， 用前预热到 37度 。
杂交溶液：将地高辛加入杂交液中，探针的浓度需要摸索（一般是 100ng-1000ng/ml，
一般是以 200ng/ml 为起点来摸索条件），所加的杂交液的体积看切片的大小来决定，
对于 2cm*2cm 的组织，一般是加 50ul，但是对于嗅球，可能 30-40ul 足够。
加好杂交液以后，用盖玻片盖上切片（注意中间不要留有任何的气泡），为防止杂交
液从盖玻片中流走，注意使切片保持水平，并且注意切片不能干燥，（干燥的话杂交
会有一个很高的背景）
在湿盒中 37 度杂交 18小时，这个杂交时间可以延长到 40 小时来提高杂交的信号，但
是前提是不能让切片干燥。
杂交后处理 ;
制备 0.5*SSC 和 1*SSC（从 20*来稀释）并且保证这两种 SSC在使用的时候的温度是
55 度。
注意配置 0.5*SSC 和 1*SSC 中含有 10mM 的 DTT （将 1.2g的 DTT 加入到 800ml 的
SSC中）
杂交后，用小镊子将盖玻片轻轻移走，然后倒掉杂交液，将切片放入洗液中，在振摇
水浴 中按照下面的要求来洗片：
快洗： 1*SSC（10mMDTT）室温
2*15min：1*SSC（10mMDTT ）55度
2*15min 0.5*SSC(10mMDTT) 55 度
1*10min 0.5*SSC（10mMDTT ）室温
将切片一直放在最后一步的溶液中一直到下一步操作。
检测：
将切片转移到 TBS 缓冲液中（ 100mM tris-HCl ，150mM NaCl，PH=7.5），将切片在
TBS 缓冲液中洗 3*5min ，
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