没有合适的资源?快使用搜索试试~ 我知道了~
资源推荐
资源详情
资源评论







微生物计数检测需氧菌总计数 USP<61>
USP<61>中文版 美国药典微生物限量
61)
微生物限度检测 (MICROBIAL LIMIT TESTS )
此章提供方法来检测可能存在的好氧微生物其他制药过程中可能出现的微生物的数量, 包
括原材料和成品中的。 如果经过验证确认可以得到相同或更好的检测结论, 也允许采用自动
化的检测方法。在样品检测过程中须进行无菌操作。若无特别说明,则“培养( incubate)”
一词指在 30—35℃的培养箱内培养 24 至 48 小时;“生长( growth)”一词用于专门的判定,
说明“存在和可能存在活的微生物” 。
准备实验 (Preparatory Testing)
本章涉及实验结果的有效性取决于: 提供的被检测样品本身在实验条件下, 被充分证明不
会抑制可能存在的微生物的生长。 因此, 在准备样品时, 需要正规的实验操作和符合要求的
实验条件,接种稀释样品到含有以下(微生物)培养物的培养基:金黄色(奥里斯)葡萄球
菌 (Staphylococcus aureus),大肠埃希氏菌( Escherichia coli ), 铜绿假单胞菌 (Pseudomonas
aeruginosa), 和沙门氏菌( Salmonella )。方法如下: 将用肉汤培养基培养 24 小时后的(微
生物)不小于 10-3 稀释的微生物培养物,加 1 ml(微生物)培养液到磷酸 (盐)缓冲液 (pH
7.2),液体大豆酪蛋白消化物培养基( Fluid Soybean-Casein Digest Medium ),或者液体乳糖
培养基( Fluid Lactose Medium )。相应培养基培养失败则需要采取以下方法更改检测程序:
(1) 增加稀释液体积,检测样品加入量仍维持不变;或者
(2) 中和一定数量的干扰因子;或者
(3) 结合( 1)、(2)得出适当条件,使接种物得以生长。
以下是一些物质的成分和浓度, 该物质及浓度可用于加入培养基、 阻止物质发挥抑菌作用:
大豆卵磷脂( soy lecithin, 0.5% )或者聚山梨醇酯 20(polysorbate 20, 4.0% )。然后重复前面
的实验,用液体酪蛋白消化物 -大豆卵磷脂 -聚山梨醇酯 20( Fluid Casein Digest-Soy
lecithin-Polysorbate 20 Medium )论证待测样品里的防腐剂或其他抑菌因子被中和。 若产品中
含有抑菌物质且产品是可溶性的,则采用“无菌实验( Sterility Tests <71> )”里的“薄膜过
滤法 (Membrane Filtration Method) ”进行 (微生物限度 )检测会更适宜( suitable)。
在抑菌物质得以适当中和、 稀释液体积大幅度增加后仍不能排除抑制因子, 以及不适宜用
“薄膜过滤法” 的情况下, 可能会因为产品本身的杀菌作用导致细菌无法生长。 当产品不能

检测出接种菌种的情况下,应用光谱法确定产品的抑菌 /杀菌成分。
缓冲液和培养基 (Buffer Solution and Media)
按照下列配方配制培养基,或者使用规范厂商生产的培养基干粉进行培养基配制,所使用
的干粉培养基应该与在此列出的培养基成分比例相似。
在按列出的配方进行培养基配制时,用水溶解固体物质,必要时可以加热以得到完全溶解
的均匀溶液。 在使用前用盐酸或氢氧化钠将培养基的 pH 值调节到要求范围, 调节 pH 值应
在 25±2 条件下进行。
若培养基配方有琼脂,应使用湿度不超过 15%的琼脂。溶解水为纯化水( Purified Water )。
PH 7.2 磷酸 (盐)缓冲液储备液—称 34g 磷酸二氢钾于 1000mL 容量瓶,加水 500mL 溶解。
用氢氧化钠 TS 调节 pH 至 7.2±0.1(约 175mL),然后加水至容量瓶刻度,混匀。分装溶
液后灭菌。冰箱保存。
培养基
除另有指出, 培养基应在高压灭菌器中加热灭菌。 (见 <1211>“灭菌”章节中的“蒸汽灭菌” )。
保存时间( exposure time)取决于培养基的灭菌体积。
1、 液体酪蛋白消化物 -大豆卵磷脂 -聚山梨醇酯 20 培养基
酪蛋白胰酶消化物 ------------------20g
大豆卵磷脂 ---------------------------5g
聚山梨醇酯 20-----------------------40mL
水---------------------------------------960mL
将胰腺酪蛋白消化物和大豆卵磷脂溶解于 960mL 水中, 48~50℃水浴加热约 30 分钟得均
匀溶液。加 40mL 聚山梨醇酯 20,混匀,按需要分装。
2、 大豆酪蛋白消化物琼脂培养基
酪蛋白胰酶消化物 ------------------15.0g
大豆粉木瓜蛋白酶消化物 ---------5.0g (Papaic Digest of Soybean Meal)
氯化钠 ---------------------------------5.0g
琼脂 ------------------------------------15.0g
水---------------------------------------1000mL 灭菌后 pH 值: 7.3±0.2
3、 液体大豆酪蛋白消化物培养基
按照 <71>无菌试验里的方法进行配制。

Soybean Casein Digest Medium under Sterility Tests<71>.
酪蛋白胰酶消化物 ------------------17.0g
大豆粉木瓜蛋白酶消化物 ---------3.0g
氯化钠 ---------------------------------5.0g
磷酸氢二钾 ---------------------------2.5g
葡萄糖( C6H12O6 H2O )--------2.5g
纯化水 ---------------------------------1000mL
4、 甘露醇 -盐琼脂培养基
酪蛋白胰酶消化物 ------------------5.0g
动物组织胃蛋白酶消化物 ---------5.0g
牛肉膏 ---------------------------------1.0g
D-甘露醇 ------------------------------10.0g
氯化钠 ---------------------------------75.0g
琼脂 ------------------------------------15.0g
酚红 ------------------------------------0.025g
水---------------------------------------1000mL
混匀,搅拌加热,煮沸 1 分钟得均匀溶液。灭菌后 pH 值: 7.4± 0.2
5、 Baird-Parker 琼脂培养基
酪蛋白胰酶消化物 ------------------10.0g
牛肉膏 ---------------------------------5.0g
酵母膏 ---------------------------------1.0g
氯化锂 ---------------------------------5.0g
琼脂 ------------------------------------20.0g
氨基乙酸(糖胶) ------------------12.0g
丙酮酸钠 ------------------------------10.0g
水---------------------------------------950mL
搅拌加热, 煮沸 1 分钟。灭菌,冷却至 45~50℃,然后加入 10mL 灭菌后的亚碲酸钾 (1:100)
和 50mL 乳状蛋黄。轻柔混匀, 。。。。。。
6、 Vogel-Johnson 琼脂培养基
酪蛋白胰酶消化物 ------------------10.0g
剩余12页未读,继续阅读
资源评论


czq131452007
- 粉丝: 0
- 资源: 12万+

下载权益

C知道特权

VIP文章

课程特权

开通VIP
上传资源 快速赚钱
我的内容管理 展开
我的资源 快来上传第一个资源
我的收益
登录查看自己的收益我的积分 登录查看自己的积分
我的C币 登录后查看C币余额
我的收藏
我的下载
下载帮助


安全验证
文档复制为VIP权益,开通VIP直接复制
