① 具有较小的相对分子质量和较高的拷贝数。②具有多个单一限制性内切酶酶切位点。
③具有两种以上标记基因。④具有安全性。
9) 简述pBR３２2质粒载体的主要特征?P25
10) 构建λ噬菌体载体的主要内容有哪些?为什么野生型的l噬菌体DＮA不宜作为基因工程
载体?该如何改造？p２8
插入型和取代型基因组大而复杂
11) 何为α－互补，在载体构建中有何作用？
α-互补：指lacZ基因上缺失近操纵基因区 段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的
β－半 乳糖苷酶（β—ｇalactoｓidase，由1０24个氨基酸 组成）阴性的突变体之间实
现互补。α－互补是基于 在两个不同的缺陷β-半乳糖苷酶阴性的突变体之 间可实现的
功能互补而建立的。 将缺失编码第1１—4１位氨基酸的β—半乳糖苷酶基 因称为ｌ
acZ△M１５基因而将半乳糖苷酶基因（lacZ) 的调控序列和编码β-半乳糖苷酶N端140
个氨基酸 的序列称为lacZ’．这两个基因的产物单独存在时 都无酶学活性,但混合在一
起时却有酶学活性.所以 在载体上加lacZ’/(MＳC),并在受体菌中引入laｃＺ △M1５即
可实现α-互补．IＰTG是lac操纵子的诱导 物,底物X－ｇaｌ被β—半乳糖苷酶分解后可
以产生蓝 色．如果质粒载体中插入了外源ＤNＡ， laｃZ’的产 物则不能与lａｃZ△Ｍ１
５基因的产物实现α-互补,在 IPTG诱导下不能产生有活性的β—半乳糖苷酶,菌 落便不
可能呈现蓝色。白色菌落便是含有插入了外 源ＤNＡ的重组质粒。因此可利用菌落颜色
变化来筛 选插入外源ＤＮA的重组质粒。 这种方法是根据组织化学的原理来筛选重
组体。主 要是在λ载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌β -半乳糖苷酶的基因片段,
携带有lac基因片段的λ 载体转入lacˉ的宿主菌后，在含有5－溴-４-氯—3－吲哚—β
－D-半乳糖苷（Ｘ—gal)平板上形成白色的噬 菌斑，非重组的噬菌体则为蓝色噬菌斑。
12) 将外源性DNA克隆到�-半乳糖苷酶失活的插入型入噬菌体上后，如何筛选重组噬菌体？
13) 简述单链DNA噬菌体M13在基因工程中的主要用途？
14) 什么是Cos质粒？简述其基本特点。
15) 什么是酵母人工染色体、细菌人工染色体、哺乳动物人工染色体？
从哺乳动物中分离出复制起始区、端粒及着丝粒构建载体可以克隆大于1０0０Kｂ的DN
Ａ
16) 什么叫插入失活,举例说明之。
