《基因工程》课程综合实验---转基因斑马鱼的构建.docx
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【基因工程】是一门以遗传学为理论基石的实践性学科,它在探索生命本质、推动生物科学发展上具有重要作用。课程【《基因工程》】在众多高等学校的教学计划中占据重要位置,通常作为专业主干课程,旨在让学生掌握基因工程的基本原理、方法和最新动态。在湖南师范大学,这门课程在2008年成为省级精品课程,推动了教学改革。 【转基因斑马鱼的构建】是基因工程课程中的一个综合实验项目,旨在培养学生的实验操作技能、实验设计能力以及数据分析能力。实验分为四个主要部分: 1. **目的基因的获取与重组载体的构建**:利用pEGFP-C2载体和组织特异启动子进行DNA连接,通过感受态细胞的制备和重组子的鉴定,使学生理解基因克隆的基本过程。 2. **质粒的提取与重组子的鉴定**:包括质粒的小量提取、限制性内切酶酶切鉴定和PCR鉴定,以验证基因插入和表达的正确性。 3. **重组载体的线性化和受体系统的获得**:涉及表达质粒的大规模制备、线性化、纯化,以及斑马鱼受精卵的获取和培养,为后续的显微注射做好准备。 4. **显微注射及转基因表型鉴定**:显微注射技术用于将重组DNA注入斑马鱼受精卵,然后通过表型分析确认转基因的成功,并进一步获取转基因纯合子。 实验教学采用小组模式,每组四人,学生需要在实验前预习,实验过程中独立操作并记录数据,实验报告需当天提交。实验成绩占课程总成绩的30%,通过实验操作和报告的质量进行评估。实验所需设备包括显微注射器、电泳设备、恒温箱等,确保实验的顺利进行。 这个实验项目不仅锻炼了学生的实践操作技能,也让他们深入理解基因工程的各个环节,如基因的克隆、表达、筛选和检测,同时也为研究生命科学、遗传疾病防治等领域提供了实际操作经验。斑马鱼因其繁殖快、胚胎透明等优点,常被用作理想的转基因动物模型,有助于基因功能研究和疾病模型的建立。
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