在分子生物学实验中,大肠杆菌菌株是常用的宿主细胞,用于克隆、表达和研究外源基因。以下是对几种常见菌株及其特性的详细解释:
1. DH5α菌株:DH5α是最常用的克隆菌株之一,特别适合质粒DNA的构建。它含有pUC系列质粒载体的蓝白斑筛选系统,通过α互补机制可以鉴别出成功导入重组质粒的菌株。此外,DH5α具有稳定的基因型,包括F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1。
2. BL21(DE3)菌株:这是一种用于高效表达外源基因的菌株,特别是那些含有T7启动子的表达载体(如pET系列)。BL21(DE3)菌株中整合了λ噬菌体DE3区,其中包含T7 RNA聚合酶,能启动目的基因的高效表达。其基因型包括F-,ompT,hsdS(rB-mB-),gal,dcm(DE3)。
3. BL21(DE3)pLysS菌株:这个菌株在BL21(DE3)的基础上增加了质粒pLysS,提供了氯霉素抗性。pLysS含有编码T7溶菌酶的基因,该酶能降低背景表达,但不干扰目的蛋白的表达,因此适合表达毒性或非毒性蛋白。
4. JM109菌株:JM109适用于pUC系列质粒载体的DNA转化,其基因型包括recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]。它通过α互补机制进行蓝白斑筛选,便于识别重组菌株。
5. TOP10菌株:TOP10是高拷贝质粒稳定遗传的理想选择,基因型为F-,mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC),φ80,lacZΔM15,△lacX74,recA1,araΔ139Δ(ara-leu)7697,galU,galK,rpsL(Strr),endA1,nupG。
6. HB101菌株:HB101以其遗传稳定性和多用途性著称,适合于各种基因重组实验。
7. M110或SCS110菌株:这两个菌株用于解决DNA甲基化问题。大部分大肠杆菌菌株含有Dam和Dcm甲基化酶,可能影响某些限制性内切酶的切割。为了解除甲基化影响,可以选择特定的同功酶或使用M110、SCS110这样的甲基化缺失菌株。
8. E.coli JM110菌株:JM110是dam-和dcm-甲基化酶缺失的菌株,用于制备不受甲基化影响的DNA。
不同的菌株根据其特性被用于不同的实验需求,例如DH5α适用于克隆,BL21(DE3)系列适用于表达,而JM110则用于避免甲基化影响。选择合适的菌株对于实验的成功至关重要。了解每种菌株的基因型和功能,可以帮助科学家更有效地设计和执行他们的实验策略。