在生物实验中,缓冲液是至关重要的组成部分,主要用于维持稳定的pH值,使得反应条件不受外界酸碱变化的影响。以下是一些常见的缓冲液配方及其用途:
1. **50×TAE Buffer (pH8.5)**:TAE是Tris-Acetate-EDTA的缩写,常用于核酸电泳,如DNA凝胶电泳。50×TAE的配方包括2 M Tris-醋酸和100 mM EDTA。Tris是一种碱性缓冲剂,醋酸提供酸性平衡,而EDTA则作为金属离子螯合剂,防止核酸降解。配制时需先称量Tris和Na2EDTA·2H2O,然后加入去离子水和乙酸,最后定容至1 L,储存于室温。
2. **10×TBE Buffer (pH8.3)**:TBE(Tris-Borate-EDTA)也是常用的核酸电泳缓冲液,其pH值略高于TAE。10×TBE由890 mM Tris-硼酸和20 mM EDTA组成。配制时同样需要称量Tris、Na2EDTA·2H2O和硼酸,溶于去离子水中,定容后保存。
3. **10×MOPS Buffer**:MOPS (3-Morpholinopropanesulfonic acid) 是一种酸碱缓冲剂,尤其适合在分子生物学实验中保持pH稳定。10×MOPS Buffer含有200 mM MOPS,20 mM NaOAc和10 mM EDTA。配制时需要精确称量MOPS,用DEPC处理水溶解,调节pH至7.0,再加入NaOAc和EDTA溶液,最后用DEPC水定容,过滤并避光保存。
4. **溴乙锭**:这是一种核酸染料,常用于DNA凝胶电泳后染色,使其可视化。10 mg/ml的溴乙锭溶液需要将1 g溴乙锭溶解在100 ml去离子水中,转移到棕色瓶中避光保存。使用时工作浓度通常为0.5 μg/ml,但要注意溴乙锭的毒性,操作时应采取适当防护措施。
5. **Agarose凝胶**:琼脂糖是制作凝胶的基础,用于核酸电泳。根据实验需求确定凝胶浓度和制胶量,将琼脂糖粉精确称量后加入含有电泳缓冲液(如0.5×TBE或1×TAE)的锥形瓶中,液体总量不超过瓶容量的50%,加热溶解后倒入模具,待冷却凝固。
这些缓冲液和溶液在实验中起着关键作用,确保核酸分析的准确性。正确配制和储存它们是实验成功的关键步骤。在进行实验时,应严格按照上述步骤操作,并注意安全,特别是处理有毒化学物质时。