各种缓冲液配方.doc

在生物实验中，缓冲液是至关重要的组成部分，主要用于维持稳定的pH值，使得反应条件不受外界酸碱变化的影响。以下是一些常见的缓冲液配方及其用途： 1. **50×TAE Buffer (pH8.5)**：TAE是Tris-Acetate-EDTA的缩写，常用于核酸电泳，如DNA凝胶电泳。50×TAE的配方包括2 M Tris-醋酸和100 mM EDTA。Tris是一种碱性缓冲剂，醋酸提供酸性平衡，而EDTA则作为金属离子螯合剂，防止核酸降解。配制时需先称量Tris和Na2EDTA·2H2O，然后加入去离子水和乙酸，最后定容至1 L，储存于室温。 2. **10×TBE Buffer (pH8.3)**：TBE（Tris-Borate-EDTA）也是常用的核酸电泳缓冲液，其pH值略高于TAE。10×TBE由890 mM Tris-硼酸和20 mM EDTA组成。配制时同样需要称量Tris、Na2EDTA·2H2O和硼酸，溶于去离子水中，定容后保存。 3. **10×MOPS Buffer**：MOPS (3-Morpholinopropanesulfonic acid) 是一种酸碱缓冲剂，尤其适合在分子生物学实验中保持pH稳定。10×MOPS Buffer含有200 mM MOPS，20 mM NaOAc和10 mM EDTA。配制时需要精确称量MOPS，用DEPC处理水溶解，调节pH至7.0，再加入NaOAc和EDTA溶液，最后用DEPC水定容，过滤并避光保存。 4. **溴乙锭**：这是一种核酸染料，常用于DNA凝胶电泳后染色，使其可视化。10 mg/ml的溴乙锭溶液需要将1 g溴乙锭溶解在100 ml去离子水中，转移到棕色瓶中避光保存。使用时工作浓度通常为0.5 μg/ml，但要注意溴乙锭的毒性，操作时应采取适当防护措施。 5. **Agarose凝胶**：琼脂糖是制作凝胶的基础，用于核酸电泳。根据实验需求确定凝胶浓度和制胶量，将琼脂糖粉精确称量后加入含有电泳缓冲液（如0.5×TBE或1×TAE）的锥形瓶中，液体总量不超过瓶容量的50%，加热溶解后倒入模具，待冷却凝固。 这些缓冲液和溶液在实验中起着关键作用，确保核酸分析的准确性。正确配制和储存它们是实验成功的关键步骤。在进行实验时，应严格按照上述步骤操作，并注意安全，特别是处理有毒化学物质时。