为了证明Nativis信号转导技术(Butters等,2014)调节藻类mRNA和蛋白质表达的能力,我们测试了是否可以改变莱茵衣藻中特定酶的水平。 通过应用源自已发表的siRNA的信号,我们抑制了色氨酸合酶β亚基(MAA7)的合成(Zhao et al。2009)。 使用较低的MAA7,在前药5-氟吲哚(5-FI)的存在下,莱茵衣藻可以生长,因为可以将较少的5-氟吲哚转化为有毒的5-氟-L-色氨酸(5-FT) 。 我们发现有信号的增长比无信号的增长了24%(±5%)。 要查看该效果是否是由于编码MAA7的mRNA数量减少所致,我们使用实时定量PCR(RT-QPCR)来测量MAA7 mRNA的水平。 为了使MAA7 mRNA水平正常化,我们将它们与不受信号影响的mRNA水平进行了比较(G蛋白β亚基样多肽,Cblp)。 有两个条件可以提高信号的有效性。 可以在对数生长期(在750 nm处以0.104 OD的密度开始培养)处理细胞培养物。 或者可以在对数增长的后期处理培养物,但处理时间更长(8.7%对3.5%的培养时间)。 在这些条件下,我们发现MAA7的mRNA水平下降了约50%。 在较早