没有合适的资源?快使用搜索试试~ 我知道了~
温馨提示
肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12 cells)去血清后,其凋亡与多巴胺能神经元的凋亡有许多共同之处,今通过研究神经干细胞(NSCs)对去血清诱导的PC12细胞凋亡的作用,进一步为NSCs移植治疗神经系统疾病提供相应的实验和理论依据。将正常培养的PC12细胞与NSCs以不同的方式进行去血清共培养,观察PC12细胞的形态,检测PC12细胞的活性,计算PC12细胞的存活率,同时检测培养基中胶质细胞源神经营养因子(GDNF)的浓度,分析不同培养方式下FNSCs对去血清诱导凋亡的PC12细胞的作用以及NSCs与去血清
资源推荐
资源详情
资源评论
维普资讯 http://www.cqvip.com
第
21
卷第
6
期
2007
年
12
月
高校化学工程学报
Journal
ofChemical
Engineering
ofChinese
Universities
No.6
Vo
l.
21
De
c.
2007
文章编号:
1003-9015(2007)06-0964-07
神经干细胞对去血清诱导
PC12
细胞凋亡的作用
李香琴
l
,
刘天庆
l
,
朱苦苦
l
,
葛
丹
l
,
崔占峰
2
(1.大连理工大学大连市千细胞与组织工程研友中心,
辽宁大连
116024;
2
.Department
ofEngìneering
Scìence, University
ofOxford
, Parks Road, Oxford
OXl
3PJ
, U K)
摘
要:肾上腺嗜锡细胞瘤细胞
(PCI2
cells)
去血清后,其凋亡与多巳胶能神经元的凋亡有许多共同之处,今通过研究
神经干细胞(N
SCs)
对去血清诱导的
PC12
细胞凋亡的作用,进一步为
NSCs
移植治疗神经系统疾病提供相应的实验和
理论依据。将正常培养的
PC12
细胞与
NSCs
以不同的方式进行去血清共培养,观察
PC12
细胞的形态,检测
PC12
细
胞的活性,计算
PC12
细胞的存活率,同时检测培养基中胶质细胞源神经营养因子
(GDNF)
的浓度,分析不同培养方式
FNSCs
对去血清诱导凋亡的
PC12
细胞的作用以及
NSCs
与去血清诱导凋亡的
PC12
细胞共培养后,其分泌
GDNF
的
能力。结果表明:①去血清诱导
PC12
细胞凋亡呈时间依赖性,去血清
72h
后
.PCI2
细胞存活的比率为
44.25%:
②
NSCs
培养基对去血清诱导凋亡的
PCl2
细胞没有明显的保护作用:③
NSCs
培养上清及
NSCs
对去血清诱导凋亡的
PC12
细
胞具有保护作用:④
NSCs
与去血清诱导凋亡的
PC12
细胞共培养后,分泌
GDNF
的能力增强。
关键诩
g
神经干细胞;
PC12
细胞:神经营养因子:调亡;共培养
中图分类号:
Q813.11
文献标
i
只码
:A
Effect
of
Neural
Stem
Cells
00
Apoptosis
of
PC12
Cells
loduced
by
Serum
Deprivatioo
LI
Xìang-qìn
l
, LIU Tian-qing
l
, ZHU Lei-Iei
l
,
GE
Dan
l
,
CUI
Zhan-feng
2
(1.Dalain Research & Develop Center for Stem Cell and Tissue Engineering, Dalian Unìversity ofTechnology,
Dalian 116024, China; 2.Department
ofEngìneering
Science, Unìversity
ofOxford
, Parks Road, Oxford
OXI
3PJ, U K)
Abstract:
The apoptosìs
of
pheochromocytoma cells lìne
12
(PC
12
cells) induced
by
serum deprivation is
similar to that
of
dopaminergic neuron cells. In this paper, the potentìal cytoprotective effects
of
neural stem
cells (NSCs)
on
the apoptosis
of
PC
12
cells induced by serum deprivation were investigated to provide
experimental and theoretical basis for the therapies
of
nervous system diseases
via
NSCs
transplantation. The
normal PC
12
cells were co-cultured with
NSCs
in DMEMJF
12
medium
仕
ee
of
serum and then PC
12
cell
morphologies
, viabilities and survival were observed with inverted microscope and assessed with CCK-8 assay,
respectively. Besides, the concentrations
of
glial derived neurotrophic factor (GDNF) in different media were
detected with
GDNF
Elisa ki
t.
Finally, the effect
ofNSCs
on
PCI2
cell apoptosis induced
by
serum deprivation
and the
NSCs'
ability to secrete
GDNF
after co-culture were analyzed. The results show
tha
t:(
PC12 cell
apoptosis induced
by
serum deprivation increases with time and after 72 h, only about 44.25% PC
12
cells
survive;
(
NSCs
culture
medium
protects against PC
12
cell apoptosis insignificantly; (
NSCs'
supernatant
and
NSCs
prevent PC12 cells from apoptosis mildly; ( the amount
ofGDNF
secreted by
NSCs
increases after
co-culture the
NSCs
with the apoptotic PC
12
cells induced
by
serum deprivation.
Key
words:
neural stem cells; PC
12
cells; GDNF; apoptosis; co-culture
1
号|
士一同
帕金森病
(Parkinson's
disease,
PD)
是一种慢性神经变性疾病,随着人口老龄化程度的提高,
PD
的发
收稿日期:
2ω
6-
1
0-
30
,修订日期:
2007-03-02.
基金项目:国家自然科学基金
(30670525):
两个基地国际合作项目
(202008):
辽宁省科学技术基金资助项目
(20022140).
作者简介
z
李香琴
(197
忡,女,辽宁大连人.大连理工大学讲师,博士.通讯联系人
z
刘天庆,
E-mail:
liutq@dlu
t.
edu.cn
维普资讯 http://www.cqvip.com
第
21
卷第
6
期
李香琴等:神经千细胞对去血清诱导
PCI2
细胞凋亡的作用
965
病率逐渐呈上升趋势
[l
,
2]
,给家庭和社会带来了沉重的负担
[3
刑。己有研究表明.
PD
的主要病理变化为神
经系统中脑黑质
(Substantia
nigr
a,
SN)
多巴肢
(Dopamine
,
DA)
能神经元的变性、坏死、缺失所致
[9-11]
。
目前
PD
的治疗主要有药物治疗、外科手术
[12-14]
、细胞移植及基因治疗等。传统的药物拍疗只能暂
时缓解症状,而不能阻止
PD
的进程,且长期应用抗
PD
药物会出现各种并发症:外科治疗以苍白球和丘
脑的毁损为主要方法,由于于术创伤大,一旦失败就会造成重度残疾
[1
匀,并非一种理想的治疗手段。从
根本上讲,这些方法都不能逆转
DA
能神经元的变性。
神经干细胞(N
eural
stem cells,
NSCs)
具有低免疫原性
[16]
、自我更新和多分化潜能
[17]
、自分出、能力
[18]
、
迁徙能力
[19]
、良好的组织相容性
[20]
以及来源广泛
[21]
等生物学特性,有望用于
PD
的治疗。目前.
NSCs
治疗
PD
的动物模型试验己经取得了很好的疗效,但是这种疗效的作用机理尚不完全清楚
[22-25]
。
由于在体实验结果复杂难以分析,因此希望通过体外细胞模型来研究
NSCs
对凋亡的
DA
神经元的
作用机理。大鼠肾上腺嗜恪细胞瘤
(pheochromocytoma
cells line
12
, PC12
cells)
所含的受体及递质与黑质
DA
能神经元相似,常作为研究
PD
的细胞模型
[26]0
PC12
细胞在去血清培养后,诱发的凋亡与一些神经
退行性疾病(如
PD)
有很多共同之处
[27]
,如都有许多共同参与调亡的基因表达及细胞凋亡的形态特征极其
相似
[28].
因此可以通过体外
PC12
细胞的凋亡模型来研究在体的一些情况。
本实验将正常培养的
PC12
细胞去血清后,与
NSCs
以不同的方式进行共培养,通过观察
PC12
细胞
的形态以及检测
PC12
细胞的存活率和培养基中胶质细胞源神经营养因子
(Glial
derived neurotrophic
factor.
GDNF)
的含量,来分析
NSCs
对调亡的
PC12
细胞的作用及其作用机理。
2
材料与方法
2.1
材料
2.
1.1
药品
DMEM, F12, Neurobasal Medium. D-Glucose. N2. B27. EGF. bFGF. Glutamax. Heparin. lipid.
BSA. Accutase
(均来自
Gibco).
N
aH
C0
3
(Sigma). FBS
(中美合资兰州民海生物工程有限公司).
GDNF Elisa
Ki
t(尚柏生物医学技术北京有限公司).
CCK-8 Kit
(日本同仁化学研究所),
Dulbecco-PBS
缓冲盐溶液(自
配)
.其它所有常规试剂均为分析纯。
2.1.2
仪器
0
.4
μm6
孔细胞共培养板
(Cell
Culture Inserts for 6-well plates. BD
Falcon
美国):酶标仪
(TECAN.
奥
地利)
:血球计数板
(XB-K-25.
上海市求精生化试剂仪器有限公司):超净工作台
(CA-920-3.
上海净化设
备厂):倒置相差显微镜
(IX70-13
1.日本
OLYMPUS
OP
Tl
CAL CO.,
Lt
d.):
离心机
(Z323.
德国
HERMLE
公司)。
2.
1.3
培养液
DMEM+I0%FBS
作为
PC12
细胞的培养基。
DME
Ml
F12
以
1:
1
体积比混合作为
NSCs
基础培养基,添加生长因子
EGF
20
ng.
mL-
1
•
bFGF
10
ng.mL-
1
及其它成分
BSA
2 mg.mL-
1
•
glucose 3
mg
、
mL-
'
构成
NSCs
培养基
DF.
并加适量
N
aH
C0
3
调节
pH
值至
7.2
。
2.
1.
4
细胞
本实验所用
NSCs
来自昆明小鼠胎儿
(EI4)
脑组织,所取得的细胞经原代培养
5-7d
后,神经球平均
E
径可达
150μm
左右,然后进行反复传代,本研究使用第四代细胞。
本实验所用
PCI2
细胞为未分化的大鼠肾上腺嗜铭细胞瘤,由中科院上海生科院提供。
PC12
细胞以
1 x
10
5
cells.
mL-
1
的密度培养
48
h
后,进入指数生长期。此时置
4'C
下约
30min.
可使细胞生长同步化。
2.2
方法
2.2.1
PCI2
细胞的培养及去血清诱导惆亡模型的建立
将
PCI2
细胞以
1
x
10
5
cells'mL-
1
的密度接种子
24
孔版中,每孔加入
500μL
培养基
•
37'C
、
5%C0
2
剩余6页未读,继续阅读
资源评论
weixin_38645208
- 粉丝: 6
- 资源: 929
上传资源 快速赚钱
- 我的内容管理 展开
- 我的资源 快来上传第一个资源
- 我的收益 登录查看自己的收益
- 我的积分 登录查看自己的积分
- 我的C币 登录后查看C币余额
- 我的收藏
- 我的下载
- 下载帮助
最新资源
资源上传下载、课程学习等过程中有任何疑问或建议,欢迎提出宝贵意见哦~我们会及时处理!
点击此处反馈
安全验证
文档复制为VIP权益,开通VIP直接复制
信息提交成功