乳酸脱氢酶A(ldha)基因的克隆与原核表达 (2012年)

乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶，在厌氧条件下能催化丙酮酸生成乳酸；当动物体内缺乏葡萄糖时，还可氧化乳酸生成丙酮酸并经葡萄糖异生途径转变为葡萄糖。通过反转录PCR获得了Hela细胞中的ldha基因，并将它克隆到pET28a(+)载体上，获得重组表达载体pET28a(+)-ldha。重组质粒通过转化法转入宿主E．coli BL21(DE3)溶源菌中。SDS-PAGE分析表明，在1．0 nlnlol・L-1异丙基硫代-β－D半乳糖苷(IPTG)的诱导下，重组子成功表达了一条分子质量约为36 kDa的目标蛋白。