紫花苜蓿(苜蓿(Medicago sativa))是一种重要的饲草作物,隶属于豆科。 它在世界各地种植作为饲料,起源于亚洲。 苜蓿品种Regen-SY用于本研究,该品种是来自Regen-S(M. sativa)和Regen-Y(Medicago falcata)研究品种的第一代自亲杂种。 这项研究的主要目的是优化苜蓿Regen-SY原生质体的分离和液体培养条件。 在研究中优化了酶的组合,孵育时间,植株年龄,离心速度和摇床速度等几个影响原生质体分离和培养的因素。 分别通过使用血细胞计数器和荧光素二乙酸酯(FDA)染色来确定原生质体的产量和生存力。 结果表明,酶组合,温育时间,植株年龄,离心速度和甘露醇浓度等因素均显着(p≤0.05)影响原生质体的产量和活力,而摇床速度对原生质体的产量和活力没有明显影响。 使用最佳条件,在液体培养基中培养原生质体,并在培养五周后形成微愈伤组织。 这项研究中建立的协议将协助研究人员在苜蓿中分离和培养原生质体,并加快诸如原生质体融合和基因工程的研究过程。