本研究探讨了基于磷铜纳米团簇（CuNCs）和细胞色素c（cyt c）之间电子转移的胰蛋白酶活性超灵敏检测及其抑制剂筛选。该方法是首次将磷光性铜纳米团簇应用于胰蛋白酶的检测，其检测原理是依赖于铜纳米团簇与细胞色素c之间的电子转移过程。
胰蛋白酶是一种重要的蛋白酶，它特异性地催化含赖氨酸和精氨酸残基的肽键和酯键的水解。在生物流体中，胰蛋白酶的水平可以作为可靠的、特定的诊断生物标志物，用于胰腺功能及其病理变化的诊断。研究中选取了细胞色素c作为猝灭剂，而磷光性铜纳米团簇作为荧光团。铜纳米团簇可以通过静电和疏水作用与带正电的细胞色素c结合，而细胞色素c中的金属血红素部分能有效猝灭铜纳米团簇的磷光性质。
在胰蛋白酶存在的情况下，细胞色素c被胰蛋白酶消化，导致铜纳米团簇的磷光性质不再被猝灭，磷光强度得以保持。基于这一机制，研究者建立了一种新的、连续的磷光检测法，用于胰蛋白酶活性的检测和其抑制剂的筛选。检测胰蛋白酶浓度与相对荧光强度的线性关系图显示出良好的线性检测范围，从0至20纳克/毫升（R^2=0.9657），并且检测下限为2纳克/毫升，远低于常规传感器在缓冲溶液中的检测限20纳克/毫升，这是因为尿液放大了铜纳米团簇的磷光信号。
该项研究的具体内容包括：磷铜纳米团簇的合成和表征、细胞色素c与磷铜纳米团簇之间的相互作用研究、以及基于这种相互作用的胰蛋白酶活性检测和抑制剂筛选方法的建立。研究结果表明，该检测方法不仅灵敏度高，而且成本低廉，操作简便，具有很高的临床应用潜力。
本研究论文还介绍了相关的实验设计与结果分析，通过一系列实验来验证所提出的检测方法的有效性和可行性。例如，研究团队对比了多种不同的纳米团簇，筛选出最适合用于胰蛋白酶检测的磷光性铜纳米团簇，并详细描述了纳米团簇的合成步骤和表征方法。
研究的创新点在于，通过电子转移的方式实现了对胰蛋白酶活性的超灵敏检测，打破了传统方法的局限性。同时，该检测方法还能够用于胰蛋白酶抑制剂的筛选，为新药研发和疾病治疗提供了重要的工具。此外，研究还证明了该方法具有较好的重复性、准确性和稳定性，为相关领域的科研工作者提供了一种新型的检测胰蛋白酶活性的技术手段。
在论文的研究背景部分，还探讨了胰蛋白酶活性在医学诊断中的重要性，以及在临床上检测胰蛋白酶水平的常规方法及其局限性。通过对现有检测方法的评述，突出了本研究中所提方法的先进性和优越性。研究论文还强调了在分析生物样品时尿液对于放大信号的增强作用，并解释了其背后的原理。
本研究通过磷铜纳米团簇和细胞色素c之间的电子转移实现的胰蛋白酶活性的超灵敏检测方法，为胰蛋白酶活性的临床检测以及相关疾病的研究提供了新的思路和技术支撑。论文所展示的研究成果对生物医学和临床诊断领域具有重要的意义。
