［收稿日期］ ２０１２ ０８ ０１
［基金项目］ 农业部 “９４８” 计划项目 （２０１１‐ｚ４１） 。
［作者简介］ 张龙岗 （１９８２ ） ， 男 ， 山东济宁人 ， 硕士 ， 助理研究员 ， 主要从事鱼类遗传育种研究 。
［通讯作者］ 朱永安 ，Ｅ‐ｍａｉｌ ： ｚｈｕｙｏｎｇａｎ１９６５＠ １６３ ． ｃｏｍ 。
ｄｏｉ ： １０畅３９６９／
ｊ
． ｉｓｓｎ ．１６７３ １４０９ （Ｓ） ． ２０１２畅０８畅００９
虫 纹 鳕 鲈 线 粒 体 ＣＯＩ 基 因 片 段 的 克 隆 与 序 列 分 析
张龙岗 ，杨 玲 ，张延华
张志山 ，刘羽清 ，朱永安
山东省淡水水产研究所 ，山东省淡水水产遗传育种重点实验室 ，
山东 济南 ２５０１ １ ７
［摘要］ 对虫纹鳕鲈 （Ｍ ａｃｃｕｌｌｏｃｈｅｌｌａ
ｐ
ｅｅｌｉｉ ） 线粒体 ＤＮＡ 细胞色素氧化酶 Ｉ 亚基 （ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ ｏｘｉｄａｓｅ
ｓｕｂｕｎｉｔ Ｉ ， ＣＯＩ） 基因进行了扩增 、 克隆和测序 ， 并对 ＣＯＩ 序列进行了分析 。 结果显示 ， 澳洲虫纹鳕鲈
ＣＯＩ 基因序列长度为 ６５２ｂｐ ， Ａ 、 Ｃ 、 Ｔ 、 Ｇ ４ 种碱基平均比例分别为 ２５ 畅３％ 、 １６ ｔ畅６％ 、 ３２ 梃畅９％ 、 ２５ ＼畅２％ ，
Ａ ＋ Ｔ 比例 （５８ 畅２％ ） 明显高于 Ｇ ＋ Ｃ （４１ 畅８％ ） 。 与从 ＧｅｎＢａｎｋ 中查到的其他 ６ 种真鲈科鱼类的同源序列
比对 ，并采用最大简约法 （ＭＰ） 构建系统进化树 ，结果显示 ： ７ 种真鲈科鱼类聚在一起 ， 分为 ２ 个大的
支系 ，麦鳕鲈属鱼类聚为一支 ，麦氏鲈属 、 鳜属和花鲈属的鱼类聚为一支 。 其中 ， 花鲈属的花鲈与鳜属
鱼类亲缘关系较近 ，与其他两属关系稍远 。 所得的聚类结果与传统的形态分类基本一致 。
［关键词］ 虫纹鳕鲈 （Ｍ ａｃｃｕｌｌｏｃｈｅｌｌａ
ｐ
ｅｅｌｉｉ） ； ＣＯＩ 基因 ； 克隆 ；序列分析
［中图分类号］ Ｑ７８５ ； Ｑ９５９ 篌畅４８３ ［文献标识码］ Ａ ［文章编号］ １６７３ １４０９ （２０１２） ０８ Ｓ０２５ ０５
虫纹鳕鲈 （Ｍ ａｃｃｕｌｌｏｃｈｅｌｌａ
ｐ
ｅｅｌｉｉ ） 隶属硬骨鱼纲 （Ｏｓｔｅｉｃｈｔｈｙｅｓ） 鲈形目 （Ｐｅｒｃｉｆｏｒｍｅｓ） 真鲈科
（Ｐｅｒｃｉｃｈｔｈｙｉｄａｅ） 麦鳕鲈属 （Ｍ ａｃｃｕｌｌｏｃｈｅｌｌａ） ， 原产于澳大利亚东南部墨瑞达令河流域 。 此鱼为世界上
最大淡水鱼之一 ， 生长速度快 、 环境适应力强 、 繁殖力强 。 不仅适合水产养殖 ， 亦可做观赏鱼 。 目前国
内虽有几家单位引进了虫纹鳕鲈 ， 但有关研究尚少 ， 主要集中在其生物学特性及驯化养殖等方面
［１‐４ ］
，
对其线粒体 ＤＮＡ （ｍｔＤＮＡ） 的研究尚未见报道 。
ＣＯＩ 基因是线粒体氧化呼吸链的重要成员 ， 进化速度快 ， 包含的遗传进化信息量大 ， 在鱼类群体遗
传结构和系统进化等领域应用较广
［５‐７］
。 本研究对引进虫纹鳕鲈 ｍｔＤＮＡ ＣＯＩ 基因序列片段进行了扩增
和测序 ， 并对其序列特征进行了分析 ，结合 ＧｅｎＢａｎｋ 中已报道的其他 ６ 种真鲈科鱼类 ＣＯＩ 基因的同源
序列进行了比较 ， 以期为虫纹鳕鲈的种质资源和遗传育种研究提供背景资料 ， 并为真鲈科鱼类分类和系
统进化提供分子生物学上的理论依据 。
１ 材料与方法
１畅１ 试验材料
试验用虫纹鳕鲈样本取自山东济南罗非鱼国家级良种场东温室水泥池 ， 由山东省淡水水产研究所从
澳大利亚引进 。 每个个体取新鲜肌肉 ， 于‐７０ ℃ 超低温冰箱中保存待用 。
１畅２ 总 ＤＮＡ 的提取与检测
取 １００ｍｇ 样品低温下剪碎并研磨为糊状 ， 采用生工生物工程 （上海） 股份有限公司的 ＵＮＩＱ‐１０ 柱
式动物基因组 ＤＮＡ 抽提试剂盒提取总 ＤＮＡ ， 保存于 － ２０ ℃ 冰箱用于 ＰＣＲ 扩增 。
１畅３ ＰＣＲ 扩增
采用已报道的一对通用引物扩增虫纹鳕鲈 ＣＯＩ 基因 。 引物序列分别为 ： ＣＯＩａ ： ５’ ‐ＡＧＴＡＴＡ‐
ＡＧＣＧＴＣＴＧＧＧＴＡＧＴＣ‐３’ 和 ＣＯＩｆ ：５’ ‐ＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＡＹＣＣ‐３’
［８］
， 引物由生工生物工
程 （上海） 股份有限公司合成 。 用 ＴａＫａＲａ 公司的 ＴＰ６５０ 型 ＰＣＲ 扩增仪扩增 ， ＰＣＲ 总反应体积为
·５２·
长江大学学报 （自然科学版）
２０１２ 年 ８ 月 第 ９ 卷 第 ８ 期 ： 农学
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｙａｎｇｔｚｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （Ｎａｔ Ｓｃｉ Ｅｄｉｔ） Ａｕｇ ．２０１２ ， Ｖｏｌ畅９ Ｎｏ畅８ ： Ａｇｒｉ Ｓｃｉ
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