球孢白僵菌毒素对昆虫体外培养细胞胞内同功酶和代谢水平的影响* (1997年)
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1997
年
3
月
第
33
卷第
1
期
北京师范大学学报(自然科学版)
Joumal
of
峭
ing
Nonnal
University
(Na
tura1
Science)
岛也
r.
1997
Vo
l.
33
NO.l
球抱自僵菌毒素对昆虫体外培养细胞
胞内同功酶和代谢水平的影晌*
武艺
1)
黄秀梨
1)
邓继先
2)
(
1)
北京师范大学生物学系，
1
∞
875
，北嗷;
2)
军事医学科学院生物工程研究所，
100071
，北京，第一作者
26
岁，女，硕士)
摘要 用吸附法从球抱自僵菌
(B
匈
lver
臼
b
栩栩
a)
的代谢产物中提取毒素，并将毒素作用于草地
夜峨
(Spodoptera
fru
伊
'perda)
体外培养细胞，以研究球抱自僵菌的昆虫致病机理.同功酶特异性染色
结果表明，细胞中毒后，细胞内的乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、醋酶等同功酶在种类和含量上都有所减
少.并发现其细胞代谢紊乱，当毒素质量浓度在
0-500mgo
L-
'
时，培养液中的葡萄糖和蛋白的质
量浓度均随细胞中毒加深而升高.
关键词
球抱臼僵茵
i
毒素;
体外培养细胞;
同功酶;
细胞代谢
分类号
S48
2
巧
Q9526
球砸自僵菌是一种虫生真菌，其致病性强，杀虫范围宽广，是具有广泛应用前景的杀虫剂.
早在
1949
年，白白
ner
[1]已提出抱子萌发时产生的物质是球抱自僵菌使昆虫致病的主要原因.近
年来，一些研究进一步表明，真菌对昆虫的致死作用是毒素[勾，并分离纯化了数种球抱白僵菌毒
素
[3-
5]
Benz
[6]
认为，真菌对昆虫的致病性是由于其在细胞水平上作用于昆虫呼吸酶系统，影响
呼吸，进而导致昆虫死亡.另有研究表明，球抱自僵菌毒素使昆虫体内环境紊乱，血淋巴中蛋白
质含量明显减少
[7]
目前多集中在球抱自僵菌毒素对昆虫作用的整体水平研究.本文是研究球抱
白僵菌的体外分泌毒素对离体昆虫培养细胞的作用，通过测定其细胞内几种同功酶和培养液中蛋
白质和葡萄糖质量浓度的变化，以揭示球抱白僵菌毒杀昆虫的作用机理.
1
材料与方法
1.1
材料球抱白僵菌
1ω'3-V
菌株本室分离;草地夜峨
Sf-21
体外培养细胞由军事医学科学
院生物工程所细胞室提供.
1.2
方法
1.
2
.1
毒素及提取将球砸自僵菌接种于查氏蛋白陈培养液中，
21-24
t
培养
7d
后，离心取培
养液，调至
pH2.0
，加
0
.5
g •
L-
1
活性碳吸附杂质，过滤取滤液.再将滤液调至
pH8.0
，加
40
g.
L-
1
活性碳吸附毒素，过滤，弃滤液，将活性碳装柱后用
pH2
的甲醇溶液洗脱
3
次，将洗脱液
调至
pH4
.5，蒸发甲醇得浓缩粘稠物，进一步用丙酣沉淀，甲醇溶解，最后乙酷沉淀，真空干燥
获得毒素
[5]
1.
22
感染细胞在细胞传代的同时，加入无菌的毒素溶液，使其最终质量浓度达半致死浓度
*国家自然科学基金资助项目
收稿日朔卿一(l!
-28
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