### 细胞工程知识点梳理
#### 一、植物组织培养技术
**1. 植物组织培养概述：**
植物组织培养是指在无菌条件下，将植物体的一部分（如根、茎、叶、花药等）置于人工配制的培养基上进行培养，使其发育成完整植株的技术。这一过程涉及细胞分裂、细胞分化等多个生物学过程。
**2. 花药离体培养：**
- **条件对比：** 花药离体培养与种子萌发的条件不完全相同。花药离体培养需要特定的营养成分、激素配比以及光照、温度等条件来促进细胞的分裂和分化；而种子萌发则主要依赖于水分、氧气和适宜的温度。
- **植株类型判断：** 若花粉粒核中有两个或多个染色体组，则通过花药离体培养得到的植株可能为二倍体或多倍体。这取决于原始花粉粒的染色体组成。
- **细胞分化激素：** 在组织培养过程中，起作用的激素不仅包括生长素，还包括细胞分裂素等，这些激素共同调控细胞的分裂与分化。
- **细胞全能性：** 整个培养过程证明了植物细胞具有全能性，即单个细胞在适宜条件下能够发育成为完整的植株。
#### 二、植物体细胞杂交技术
**3. 植物体细胞杂交概述：**
植物体细胞杂交是指通过原生质体融合的方式，将来自不同物种的细胞融合在一起，从而产生杂种植株的技术。
**4. 原生质体获取与融合：**
- **原生质体获取：** 通过去除植物细胞壁获得原生质体，常用的酶包括纤维素酶和果胶酶。淀粉酶不适用于此过程。
- **融合方法：** 通常使用聚乙二醇(PEG)、电激等方法诱导原生质体的融合，但灭活的病毒不适用于植物细胞的融合。
- **杂种细胞识别：** 杂种细胞的形成可以通过观察新的细胞壁的产生来进行确认。
- **愈伤组织与植株再生：** 从愈伤组织形成完整植株的过程中，需要经历脱分化和再分化的两个阶段。
#### 三、动物细胞培养与体细胞克隆
**5. 动物细胞培养概述：**
动物细胞培养是在体外条件下，使动物细胞生长繁殖的技术。这一过程对于生物制药、疾病模型构建等领域具有重要意义。
**6. 细胞培养的特点与限制：**
- **细胞层数：** 培养的细胞如果保持接触抑制特性，则不会形成多层细胞。
- **基因型变化：** 少数细胞在培养过程中可能会发生基因型的改变。
- **传代次数：** 二倍体细胞的传代次数通常是有限的。
- **恶性细胞培养：** 恶性细胞系可以在培养条件下无限增殖。
**7. 单克隆抗体制备：**
- **抗原注射：** 实验小鼠注射的抗原是为了诱发特定抗体的产生。
- **细胞融合：** 使用聚乙二醇(PEG)、灭活病毒或电激等方法可以诱导细胞融合。
- **筛选与克隆化：** 通过特定的选择培养基筛选融合细胞，并进行克隆化培养以获得高产细胞系。
#### 四、动物细胞工程的应用
**8. 动物细胞工程的应用实例：**
- **胰蛋白酶处理：** 用胰蛋白酶处理动物组织可以获得单个细胞，并进一步制备成细胞悬液。
- **基因突变与毒性评估：** 观察细胞中的基因突变比例可以帮助评估某些化学物质的毒性。
- **细胞融合与杂种细胞培养：** 动物细胞融合后形成的杂种细胞不能直接培养成完整的动物个体。
#### 五、抗EGFR/CD3双特异性抗体的研究
**9. 抗EGFR/CD3双特异性抗体：**
- **抗原分布特点：** EGFR只存在于正常上皮细胞和肿瘤细胞中，这是由于相关基因在不同类型的细胞中表达模式的差异。
- **单克隆抗体优势：** 单克隆抗体具有高度特异性、纯度高等特点。
- **基因表达载体构建：** 构建基因表达载体时，需要包含启动子、终止子等元件，并且需要使用限制性核酸内切酶和DNA连接酶等工具。
- **免疫效果评估：** 通过比较不同抗体处理下的T细胞激活比例和杀伤效率，可以评估抗EGFR/CD3双特异性抗体的免疫效果。结果显示，该双特异性抗体能够显著提高T细胞对肿瘤细胞的杀伤效果。
- **免疫机理：** 双特异性抗体能够同时结合肿瘤细胞上的EGFR和T细胞上的CD3分子，促进T细胞活化，增强其对肿瘤细胞的识别和杀伤能力。
