(一) 蛋白样品制备
以体外培养的贴壁细胞样本为例,对其进行总蛋白提
取:
1 、 倒掉培养液,并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸
干培养液(或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到
瓶底然后再用移液器将其吸走)。
2 、 每瓶细胞加 3ml 4℃ 预冷的 PBS ( 0.01M
pH7.2 ~ 7.3 )。平放轻轻摇动 1min 洗涤细胞,
然后弃去洗液。重复以上操作两次,共洗细胞三次以
洗去培养液。将 PBS 弃净后把培养瓶置于冰上。
3 、 按 1ml 裂解液加 10 μl PMSF ( 100mM ),
摇匀置于冰上。( PMSF 要摇匀至无结晶时才可与裂
解液混合。)
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