（四）人工接头连接法
质粒和cDNA上的同聚物长度难以控制相等，影响克隆效率；
解决方法：用细菌的碱性磷酸酶预先处理线性的载体DNA分子，去除其5‘末端的磷酸基。
⑴人工接头连接法：通过依次加入、连接合成DNA接 头，再用限制酶切加以解决。
dA(dG)和dT(dC), 然后在DNA连接酶的作用下, 连接成为重组的DNA。
若在体外连接反应中增加人工接头的浓度，还会大大提高平末端DNA片段间的连接效率。
三．基因与载体的连接 4种方法
在连接酶的作用下即可形成重组DNA分子.
将目的基因导入受体细胞
1）位于载体上特定的酶切位点要尽可能少,最好是单一酶切位点,这样才能保证目的基因和载体DNA以最高的几率正确组合.
基因工程在20世纪取得了很大的进展，至少有两个有力的证明。
开展基因工程研究几十年来，建立了多种分别适用于微生物、动植物转基因的载体受体系统，克隆出了一批有用的目的基因，研制出
了数十种昂贵的基因工程药物，培育出了一批具有特殊性状的转基因动植物。
1.提取目的基因
2.目的基因与运载体结合
（基因表达载体的构建）是基因工程的核心。
3.将目的基因导入受体细胞
4.目的基因的检测和表达
切、接、转、增、检
重组DNA技术的操作步骤：
