病毒感染细胞试验整体流程和原理.pdf

病毒感染细胞试验是生物学研究中常用的技术，主要用于探究病毒与细胞之间的相互作用，以及病毒基因的表达和功能。本文主要讨论了两种常用的病毒载体系统：慢病毒（Lentivirus）和腺病毒（Adenovirus），并概述了它们的构建、包装和应用。 1. 慢病毒 慢病毒属于逆转录病毒的一种，其特点是能够感染分裂和非分裂的细胞，包括神经元细胞和干细胞等难以转染的细胞类型。慢病毒的基因组可以整合到宿主细胞的基因组中，实现长期稳定的基因表达，适用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。慢病毒的包装过程主要包括构建含目的基因的慢病毒RNAi干扰载体、共转染包装细胞293T、收集病毒上清、病毒纯化和浓缩、分装保存以及目的基因检测。 2. 腺病毒 腺病毒是一种线性双链DNA病毒，不依赖宿主细胞的分裂进行复制，且能感染多种细胞类型。腺病毒常被改造为复制缺陷型，减少潜在风险。腺病毒具有高滴度，可高效扩增，且感染后不会整合到染色体，生物安全性较高。腺病毒的包装过程涉及构建含siRNA/miRNA的腺病毒载体、质粒转染293A细胞、病毒扩增、分装保存。 3. 慢病毒与腺病毒的比较 慢病毒和腺病毒在基因组类型、复制方式、整合机制、感染细胞类型和表达水平上有所不同。慢病毒基因组为RNA，能整合宿主基因组，适合长期稳定表达；而腺病毒基因组为DNA，不整合，表达水平较高。两者的感染范围不同，慢病毒能感染分裂和非分裂细胞，腺病毒则更广泛。 4. 目的基因载体构建 构建目的基因载体通常涉及克隆策略，如通过酶切和PCR扩增方法将目的基因插入载体。载体常包含抗生素抗性基因，便于筛选和确认目的基因的插入。 5. 质粒DNA转化 转化大肠杆菌是将含有目的基因的质粒导入菌体，以便在细菌中扩增并提取质粒。转化过程包括受体细胞的制备、质粒DNA的导入以及在选择培养基上的筛选。 病毒感染细胞试验是现代生物学研究中的重要工具，通过慢病毒和腺病毒等载体，科学家可以研究基因的功能，开发基因疗法，以及深入理解病毒与细胞的相互作用机制。