细胞自噬检测归类.pdf

细胞自噬是生物学中一种重要的细胞自我调控机制，它涉及细胞内部蛋白质和细胞器的降解与回收。在正常条件下，细胞自噬活性较低，但通过特定的实验手段可以人为地诱导或抑制这一过程，以便进行研究。这篇文档主要介绍了细胞自噬的检测方法和归类，包括诱导剂和抑制剂的使用，以及多种技术来观察和评估自噬活动。 自噬的诱导剂主要包括Brefeldin A、Thapsigargin、Tunicamycin等，它们模拟内质网应激；Carbamazepine、L-690,330、氯化锂作为IMPase抑制剂；Earle's平衡盐溶液用于制造饥饿状态；N-Acetyl-D-sphingosine抑制Class I PI3K途径；Rapamycin是mTOR抑制剂；Xestospongin B/C则阻断IP3R。另一方面，自噬抑制剂有3-Methyladenine (3-MA)，抑制Class III PI3K；Bafilomycin A1作为质子泵抑制剂；Hydroxychloroquine是溶酶体腔碱化剂。 在自噬检测方面，透射电镜是最直接的方法，用于观察自噬体的形态变化，如Phagophore的新月状或杯状结构，以及自噬体和自噬溶酶体的特征。此外，GFP-LC3融合蛋白技术在荧光显微镜下提供了实时监测自噬形成的可能，通过计算GFP-LC3斑点数量评估自噬活性。Western Blot检测LC3-II/I比值的变化也是常用方法，但需要注意溶酶体活性的影响。非特异性检测方法如MDC染色和CellTrackerTM Green染色也可提供参考，但它们无法区分自噬体与其他酸性液泡。 在自噬相关蛋白的定位上，Lamp-2作为溶酶体膜蛋白有助于观察自噬体与溶酶体的融合；LysoTrackerTM探针显示所有酸性液泡；pDsRed2-mito和MitoTraker探针则用于线粒体的检测，尤其在Mitophagy研究中；Hsp60和Calreticulin分别作为线粒体基质和内质网的标记物。 总结来说，细胞自噬的检测涉及到多种药物诱导和抑制，以及多种显微镜技术与蛋白定位方法。通过这些手段，研究人员能够深入理解细胞自噬的过程及其在生理和病理条件下的作用。在进行实验时，选择合适的工具药和检测方法至关重要，以确保结果的准确性和可靠性。