ELISA 常见问题及处理方法
一、概述
ELISA 试验以灵敏度较高,特异性较好的特点在临床上、兽药残留检测得到了广泛的应用,但操作中的各个
环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致实验失败。
二、样本的处理
步骤:采样与样品的制备(样品预处理) 提取 净化 浓缩 检测
三、样品制备
(1)样本采集来后应应注意:
1.遵循代表性原则
2.除去不可食部分
3.防止处理样本时被污染
3.如需制成同一样本,应将其混匀后再分次匀将
4.匀将后分袋分装(一般用 2 号自封袋,每袋约 30g)
5.样品储存在–20℃
6.不使用有异味或坏了的样本.
四、药物提取
用溶剂将待测样品中兽药溶解、分离出来的操作步骤。
根据样本和待测兽药种类,用不同溶剂和方法进行提取。
原理:相似相溶。选择与待测兽药极性相似的溶剂,提取剂沸点应 45~80℃,且不能与样本发生作用,
毒性低,价格便宜,必须能溶解待测兽药。对含水量高的样本,一般选与水相混溶的溶剂(乙腈、丙酮等),
要求溶剂对样本有较强的渗透能力,以便能将样本中兽药充分提取。当单一溶剂效果不理想,可选择 2 种
或 2 种以上不同极性的溶剂,以不同比例配成混合提取剂。
四、提取方法
①振荡法:将提取溶剂加入到装有样品的具塞容器中,振荡,使容器内的样品与提取溶剂充分接触,以
深入到样本组织内部提取待测组分
振荡方式:
振荡器上进行上下、往返式振荡。手摇式上下振荡
注: 1、在组织样本中加入有机溶剂之间提取时,应边加边振荡,防止组织凝结成团,不利于提取。
②均质法:用均质机对加提取剂的样本快速均质。特点是快速、简便。
③超声法:样本加入提取剂,以超声波提取。
④索氏提取:提取效果好,但时间长,干扰物多。多用于动物样本。
⑤快速混匀法:适用于液体样品。
五、净化
将样本中待测兽药与干扰杂质分离的步骤。原则是尽量完全除掉干扰杂质,而又使待测兽药损失尽量
少。但经过提取的待测组分,提取物中通常含有一些会干扰试剂盒中抗原抗体反应的杂质或者是含有与待
测物结构相似的杂质,这就导致我们在检测过程中出现假阳性。在我们现有的试剂盒前处理方法中涉及到
的最常见的净化是:液液分配法(还可以用吸附柱层析和固相萃取)
六、浓缩
由于净化过程中引入的溶剂,可能会降低待测组分的浓度或者不适宜直接分析,需要去处全部有机溶
剂进行溶剂转换。相当于试剂盒前处理步骤中把样本在 60 度氮气下吹干,再用复溶液溶解干燥残留物。
一.浓缩方式:
氮气吹干除杂 压缩空气吹干除杂