2019年SDS研究实验报告.pdf

SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种广泛用于蛋白质分子量测定的电泳技术。该技术的核心在于利用SDS（十二烷基硫酸钠）这种阴离子表面活性剂与蛋白质结合，形成稳定的复合物，从而消除蛋白质分子间电荷和形状的差异，使得蛋白质在电泳过程中的迁移率主要取决于其分子量。 在SDS-PAGE中，蛋白质首先被加热和酸处理，以诱导变性，破坏其天然构象，暴露出内部的疏水区域。然后，SDS与蛋白质按比例结合，形成线性的复合物，SDS的比例远大于蛋白质，使得蛋白质带上大量负电荷，远远超过了它原本的电荷。SDS的加入还有助于维持复合物的均匀形状，通常为棒状，长度与蛋白质分子量成正比，而宽度则是恒定的。因此，通过比较蛋白质在凝胶中的电泳迁移率，就可以估算出其分子量。 聚丙烯酰胺凝胶作为电泳介质，其孔径大小可以调节，从而适应不同分子量范围的蛋白质分离。小分子量的蛋白质在更细小的孔径中移动更快，反之亦然。在电场的作用下，带负电的蛋白质-SDS复合物从凝胶的一端向另一端迁移，通过凝胶的浓度梯度，实现分子量的分离。 SDS-PAGE的优点在于其高分辨率和低成本，可以精确地测定15,000至100,000道尔顿之间的蛋白质分子量。对于低于10,000道尔顿的水解蛋白，可以通过添加强电解质离子来改善分辨率。与其他方法相比，如质谱法，SDS-PAGE的误差通常在±10%以内，适用于大量样本的快速分析。 实验操作中，需要掌握SDS-PAGE的整个流程，包括样品制备、凝胶配制、电泳运行和染色检测等步骤。通过与活性电泳的对比，可以更好地理解电泳技术的原理和应用差异，增强对蛋白质分析技术的理解。 SDS-PAGE是蛋白质分子量测定的常用方法，依赖于SDS对蛋白质的变性作用和电荷掩盖能力，使得电泳迁移率主要取决于分子量，从而实现蛋白质的分离和定量。这一技术在蛋白质研究、生物大分子的鉴定和纯化等领域具有广泛的应用。