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PCR 常见问题分析及对策(无扩增产物、非特异性扩增、拖尾、假阳性)
问题 1:无扩增产物
现象:正对照有条带,而样品则无
原因:
1.模板:含有抑制物,含量低
2.Buffer 对样品不合适
3.引物设计不当或者发生降解
4.反应条件:退火温度太高,延伸时间太短
对策:
1.纯化模板或者使用试剂盒提取模板 DNA 或加大模板的用量
2.更换 Buffer 或调整浓度
3.重新设计引物(避免链间二聚体和链内二级结构)或者换一管新引物
4.降低退火温度、延长延伸时间
问题 2:非特异性扩增
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