基因测序( PCR常见问题)生物专业很实用
PCR常见问题
PCR常见问题分析及对策 ( 无扩增产物、非特异性扩增、拖尾、假阳性 )
问题 1:无扩增产物
现象:正对照有条带,而样品则无
原因 :
1. 模板: 含有抑制物,含量低
2.Buffer 对样品不合适
3. 引物设计不当或者发生降解
4. 反应条件:退火温度太高,延伸时间太短
对策 :
1. 纯化模板或者使用试剂盒提取模板 DNA或加大模板的用量
2. 更换 Buffer 或调整浓度
3. 重新设计引物(避免链间二聚体和链内二级结构)或者换一管新引物
4. 降低退火温度、延长延伸时间
问题 2:非特异性扩增
现象:条带与预计的大小不一致或者非
特异性扩增带