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荧光共振能量转移技术
荧光共振能量转移技术
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荧光共振能量转移技术
F
luorescence
r
esonance
e
nergy
t
ransfer,
FRET
1.
荧光共振能量转移的
基本概念与理论
受体研究技术
化学技术
免疫共沉淀
放射配基结合分析
物理技术
X-
射线衍射
核磁共振
电子显微镜
这些技术
要求较大量的样品
常常只能在非生理条件下完成
很难观察到实时的（
real time
）分子间的反应
荧光共振能量转移技术
荧光共振能量转移技术是一种物理技术
用分子生物学技术可将待研究分子进行荧光蛋
白标记并在细胞表达
研究受体
-
配基的相互作用
测定受体
-
配基相互作用的距离
测定受体亲和常数
受体二聚化
受体构象变化
该技术的最显著特点是在平衡条件下，无需分
离游离配基和结合配基
,
即可测定平衡常数
RBA
技术需要分离游离配基和结合配基
荧光共振能量转移技术
FRET
的优点
高灵敏度
：现在可以用此方法在溶液中或单细
胞水平研究
单个
受体分子
可以和许多技术结合
：如显微镜、流式细胞计
、共聚焦显微镜、稳态和瞬态荧光光谱，在生
理条件即活细胞状态下，选择性地研究分子间
的相互作用
可以从商业上得到各种荧光探剂
:
用它们可以
标记各种所要研究的无荧光特性的分子如配体
，因而大大地开阔了研究途径
1.1
荧光与荧光光谱
分
子
具
有
不
同
能
级
：
分
子
中
的
外
层
电
子
，
一
般
处
于
电
子
的
基
态
S
0
(electronic
ground
state
)
的
最
低
振
动
能
级
吸收光能以后，它可以被
激发
到第一电子激发态
S
1
的
任意振动能级。这－过程发生在
10
-15
s
时间内
被激发的分子，首先释放能量回到
S
1
的最低振动能级
，此过程发生在
10
-12
s
内；然后
从
S
1
的最低振动能级回
到
S
0
的各振动能级
，并以光子的形式释放能量，即发
射
荧光
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