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Snapshot技术平台中文.docx
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Snapshot 技术平台
SnaPshot 技术平台是 Applied Biosystems,ABI 公司推出了专为检测 SNP 设计的分析软
件和试剂盒可对多个 SNP 位点同时进行基因分型 也被称为 minisequencing
。
该方法针对
不同突变位点设计不同长度的引物 SNaPshot 反应后,产物通过电泳分离、五色荧光检测、
Gene mapper 分析,可在 一次电泳胶 内检测 多个 SNP 位点。这个平台是建立在 3730,
3130 等 PCR 测序仪上的技术。
3730XL 型 DNA 序列检测仪
一.??? SnaPshoE:作原理
应用 SNaPshot 进行定点的序列分析 ,其基本原理遵循了 DNA 直接测序中的双脱氧
终止法,所不同的是 PCR 反应中只有不同荧光标记的 ddNTP。由于每个 SNP 位点的引物
3'端都紧靠 SNP 点,因此每一种引物在聚合酶作用下 ,根据模板的的序列,只延伸一个核
甘酸。然后用先进的荧光检测系统 ,检测延伸的那个核甘酸的种类。
1 .多重 SNaPshot 反应的工作原理: 在一个 SNaPshot 反应体系中, 针对每个待测 SNP 位
点 在其上游或下游设计一条单向的寡核甘酸引物 (正向引物或反向引物) ,引物的 Tm 值
要求在 50 度以上,在 AmpliTaq 聚合酶和 4 种不同荧光标.记的 ddNTP 存在的情况下,各条 引物与各自互补
的 DNA 模板 Z^合,聚合酶在引物的 3'末端延伸单个碱基反应即告终止 ,
产物的长度为引物长度 +1bp。延伸的碱基就是该样本在该位点上的基因型 ,其中纯合子表
现为单峰,杂合子表现为双峰 。为了能够分辨不同 SNP 的不同基因型,可在引物的 5'末端
加上不同长度的 Poly C 或 Poly T,使各条引物以长度区分。经电泳将其分开。最短的引物
一般设定为 20bp,相邻两个 SNP 的引物之间长度一般相差 4-6 个核甘酸,以便区分。 多重
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feifei_2019
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