连杆（linkeｒ）：化学合成的 8~12 个核苷酸组成的寡核苷酸片段.以中线为轴两边对称，其
上有一种或几种限制性核酸内切酶的识别序列,酶切后可产生一定的粘性末端，便于与具有
相同粘性末端的另一 DNA 片段连接。
衔接头(aｄaｐtor）：化学合成的寡核苷酸，含有一种以上的限制性核酸内切酶识别序列。
其一端或两端具有一种或两种内切酶切割产生的黏性末端。
底物位点优势效应:酶对同一个 DＮＡ底物上的不同酶切位点的切割速率不同。
激酶：对核酸末端羟基进行磷酸化的酶.
2．说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。
用属名第一个字母和种名的头两个字母组成的３个字母斜体的略语表示寄主菌的物种名以
及菌株（型）的代号命名。该菌株（种）中发现的不同的酶按照顺序以罗马字母编号 I, I
Ｉ, IＩＩ等.如：
Eschｅrｉchia coli
用 Eco 表示。第四个字母代表菌株或株型、变种名，
若酶存在于质粒上，则需大写字母表示非染色体遗传因子。例：
Hin
d ＩII 从流感嗜血菌株
(
Ｈaemophilｕs Inflｕｅnzuｅ
)d 株中分离的第三个酶。
Eco
R I 表示基因位于
Eschericｈ
ｉａ coli
中的抗药性 R 质粒上。前三个字母用斜体,其他用正体表示.如果酶存在于一种特殊
菌株中,三个字母后加上菌株名称符号，名称最后部分往往包含罗马数字，�表示在该特殊
菌株中发现这种酶的先后次序。
３。 引起限制性核酸内切酶星活性的可能因素有哪些？
若使用 buffer 不当, 会有 sｔar ａcｔｉvitｙ，而ｓtaｒ ａcｔiviｔｙ是指限制酶对所作
用的 DＮＡ及序列失去专一性， 当酶辨认切割位置的能力降低，导致相似的序列或是错误
的辨认序列长度也会作用,而产生错误的结果。所以当 DNＡ同时以两种限制酶处理时，选择
可使两种酶之活性反应均可达 75﹪以上的 rｅstriction buffeｒ，若找不到适当的ｂｕffer
则先加低盐的 buffer 使其中一酶作用后，在加入高盐 buｆfeｒ使另一酶作用，若无法以盐
的高低分别加入不同的 bｕｆfer，则先加入一种 bufｆer 作用后,加 3M NａOAc/95﹪aｌco
ｈoｌ沉淀 DＮA，再加另一种 buffer 作用。
４． DNA 片段之间的连接方式有哪些?
具黏性末端的 DNA 片段之间的连接、具平末端ＤＮA 片段之间的连接、DNA 片段末端修饰
后进行连接、DNA 片段加连杆（linker）后的连接。
5。 什么是Ｋlenoｗ酶？有哪些活性?在基因工程中有什么作用？
Klenow DＮA 聚合酶是
E．cｏli
DNＡ ｐolymｅrase Ⅰ 经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）
裂解而从全酶中除去 5’－－3’ 外切活性的肽段后的大片段肽段，而聚合活性和 ３'--5’
外切活性不受影响。也称为 Kｌｅnoｗ 片段（Kｌｅnow ｆragment）,或
Ｅ．colｉ
DNA
聚合酶 Ⅰ 大片段。5®¢３¢聚合酶
3®¢５¢外切酶
无小亚基活性
6。 DNA 聚合酶、RＮA 聚合酶、反转录酶、末端转移酶、多核苷酸激酶和碱性磷酸酯酶有
哪些主要特性?它们在基因工程中的主要用途分别是什么?
第三章 基因工程的载体
１．名词解释：
载体：指能够运载外源 DＮＡ片段（目的基因）进入受体细胞,具有自我复制能力，使外源Ｄ
NA 片段在受体细胞中得到扩增和表达,不被受体细胞的酶系统所破坏的一类ＤNA 分子.
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