ii.限制酶的纯度和稳定性
i)纯度：尽可能保持厂家推荐的反应条件
ii)稳定性：保存和反应
iii.反应缓冲液：常用三种核心缓冲液，即高（H），中（M）
，低（L）盐缓冲液，不同温度下的pH值
iv.反应温度：大多数为37℃
v.双酶切和多酶切反应
同时酶切和分别酶切。前者要求两种酶使用的缓冲液和反
应温度必须相同，即使相同时，一旦发生部分酶切反应，
便无法判断是何种酶造成的，因此最好采用后者--分别酶切
。
i)第一种酶切电泳检查酚/氯仿纯化第二种酶切。
可不考虑酶切先后顺序，但操作步骤多。
ii)采用低浓度盐缓冲液的限制酶切电泳检查采用高
浓度盐缓冲液的限制酶切。操作简单，但要分先后。
假如两酶切位点相距很近（如多克隆位点区），首先考虑
的则是相互间的酶切是否有影响，两种酶切顺序不同时，
其结果大不相同。
如SmaI-BamH(c),BamHI-SmaI(p)
.
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