三、基因组文库构建的程序
1 、基因组DNA 克隆片段的制备
①高分子量基因组DNA 的提取
②DNA 克隆片段的制备
机械剪切法( 移液器抽吸法、超声波裂解法) :随机性高,但产生平头末端 DNA 片段,连接效率不高。
限制酶消化法(Sau3AI、 MboI、 Hae )Ⅲ :有非随机倾向,但产生黏性末端DNA 片段,连接效率高。
2、载体 DNA 片段的制备
① 酶切;一般用BamHI,产生与基因组DNA 克隆片段相匹配的黏性末端。②碱性磷酸酶处理; ③载体DNA 片段纯化。有机溶剂抽提乙醇沉淀法、蔗糖密度梯度离心法。
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