和组织学了解移植骨吸收情况及周围组织的变化情况；采用免疫组化染色检测移
植骨周围组织中 Thl7 细胞特异转录因子及相关特征因子 IL-23-IL-17 与 RANKL
的表达的差异。
2、本实验对 AAV-8 系统进行了改良，三质粒体系，即含有多克隆位点的骨架
质粒 pAAV-MCS/pCMV-MCS、包装质粒 pAAV-RC 和辅助质粒 pAAV-Helper 简
化 为 双 质 粒 系 统 ， 用 真 核 表 达 载 体 pTR-UF22 代 替 骨 架 质 粒pAAV-
MCS/pCMV-MCS 和包装质粒 pAAV-RC，与辅助质粒 pAAV-Helper 组成双质粒体
系，AAV 的包装所需的 ITR、外源基因、Rep 和 Cap 都存在于双质粒体系中，可
完成病毒包装。此方法简单高效，简化了质粒提取的过程。病毒包装后， 显示病毒
具有感染性，可用于下一步的体内实验。
结 果
1、组织学检查结果显示，在 4 周的观察期内与对照组相比较异种移植物周
围组织大量炎症细胞浸润。移植后第一周炎症反应最为显著。从骨移植第二周开
始移植组织中出现破骨细胞。破骨细胞多分布于骨组织周围，有的表现为多核巨
细胞形态，该细胞具有骨吸收功能。在移植第四周，异种移植组的骨吸收情况显著，
而在异种移植组经 IL17 中和性抗体处理组骨吸收情况大大减轻。
2、免疫组织化学染色结果显示，移植组可见散在的 IL-17, IL-23 和 RANKL
表达阳性细胞，而假手术组则表达阴性。与对照组比较，异种移植组 IL-17, IL-23 和
RANKL 阳性细胞从移植后一周至移植后四周呈表达逐渐增多趋势；而在异种移植组
经 IL-17 中和性抗体处理后，IL-17 的表达水平从从移植后一周至移植后四周明
显降低。并且，在异种移植组经 IL-17 中和性抗体处理后，RANKL 阳性细胞也有
所下降。但是，IL-23 阳性细胞浸润的数目无明显改变在异种移植组经 IL-17中和
性抗体处理组。
3、IL-17 基因的 ORF 共 477 bp，编码 158 个蛋白，预计目的蛋白分子量为
15 kD。从 Western blot 图中显示，15 kD 上方位置可见目的蛋白条带，即目的蛋
白大小在 15 kD 左右，结果符合预期。证明腺相关病毒 pAAV8-IL17 感染 293T
细胞后，可检测目的基因 IL-17 蛋白表达。
结 论
1、IL-17 在增加 RANKL 表达，诱导破骨细胞生成，以及炎症环境下异种骨
